芯片连续流平板电色谱用于蛋白质的分离.pdfVIP

第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 P．E013 芯片连续流平板电色谱用于蛋白质的分离幸 王平利80，张丽华b，张玉奎6 16023 8中国科学院分离分析化学重点实验室，国家色谱研究分析中心，大连化学物理研究所，大连1 6中国科学院研究生院，北京100039 关键词：连续流平板电色谱，微流控芯片，整体材料，蛋白质分离 l 引言 对于开放系统的平板电色谱，流动相不仅堆积在固定相表面，而且由于蒸发等原因使得流动相 在固定相中中分布不均匀，且随分离过程不断减少，因此严重影响了其分离效果I¨】。本文将整体材 料固定相通过原位光引发聚合引入自由流芯片分离腔中，在相对密封的环境下进行染料和FITC标记 的蛋白质的分离，不仅有效地克服上述问题，而且获得了较好的分离效果。 2 实验部分 后将反相整体材料的预聚物混合溶液引入分离腔，用封板膜密封住进样口和出口后，放在紫外光下 聚合。最后用乙醇彻底冲洗整体材料，除去残留的反应溶液。用流动相彻底平衡整体材料后，进样， 并加电分离。 芯片连续流平板电色谱的流动相分别为30％ACN．5mM 9．O)和50％ACN．5mM Tris．HCl(pH Tris-HCI(pH 考察整体材料的保留机理；利用FITC标记的碳酸酐酶和肌红蛋白考察对蛋白质的分离能力。 3结果与讨论 受芯片的微通道尺寸限制，在FFE芯片中引入颗粒固定相难度很大。因此，本文通过原位光引 发聚合反应，在芯片分离腔内通过制备整体材料，发展了芯片自由流电色谱模式。 通过优化反应物的种类和组成，最终选择的单体是BMA和EDMA，致孔剂是1．丙醇、l，4_丁二 10％；AMPS占单体的0．3％。上述比例均为质量比。 丙醇59％，1,4．丁二醇31％，water 实验中通过调整单体和致孔剂的比例可以改变材料的致密性。我们选取了三种配比。其中M1： 谱的保留机理，带电荷的甲基绿先流出整体材料，保留很弱；而罗丹明B随后流出，染料条带颜色 变深，这说明材料具有较好的色谱性质。而两种蛋白质的混合物在芯片连续流电色谱的模式下实现 了分离。 一 上述实验结果表明，在FFE芯片中引入整体材料后，可实现连续流平板电色谱。通过原位光引 发聚合反应，可以在分离腔内合成具有不同保留机理的整体材料(反相、离子交换)，从而实现多模 式的样品连续分离和微制备。 参考文献 【1】Raymond，D．E．；Manz,A．；Wider,H．M．AnalChem．1994，66，2858-2865 【2】Dzido，T．H．；Ptocharz,P．W．；§]azak,P．Anal．Chem．2006，78，4713-4721 【3】Kyung,W．IL；Nayak,＆；Knapp，D．ILElectrophoresis2006，27，3547-3558 【4】Hilder,E．F．；Svee，F．；Fr6ehet,J．M．J．JournalofChromatography气1044(2004)抛2 ‘重大科学研究计划(2007CB914100)资助