以苯硼酸为识别物质的电化学阻抗糖传感器的制备.pdfVIP

第4l卷 分析化学 FENXIHUAXUE 研究报告 第10期 2013年10月 ChineseJournalof 1537～1542 AnalyticalChemistry 以苯硼酸为识别物质的电化学阻抗糖传感器的制备 李丛丛1 李晓霞2 罗贤文2 漆红兰州 陕西省生命分析化学重点实验室，陕西师范大学化学化工学院，西安710062 2 延安大学化学与化工学院，延安716000 摘要以苯硼酸为识别物质，利用巯基自组装法将半胱胺与4一甲酰基苯硼酸反应形成的Schiff’S碱固定于 金电极表面，构建了检测葡萄糖、乳糖、甘露聚糖的电化学阻抗传感器。根据传感器结合糖前后电子转移阻抗 mmol／L 9．0的5 值的变化 AR。 ，分别进行了葡萄糖、乳糖、甘露聚糖的分析测定。以pH K，[Fe CN 。]一 5mmol／L mol／L K。[Fe CN 。]平衡电对溶液作为检测溶液，AR。与葡萄糖的浓度在5．05×104～5．05×104 之间呈良好的线性关系，检出限为9．7×10。10mol／L S／N 3 ；AR。与乳糖的浓度在2．78×104— 2．78x10。5 mol／L之间呈良好的线性关系，检出限为8．1×10。10mol／L S／N 3 ；AR。与甘露聚糖的浓度在 4．35x104—4．35×10。mol／L之间呈良好的线性关系，检出限为3．4×10。omol／L S／N 3 。该方法简单、 灵敏、成本低，可用于不同种类糖的分析检测。 关键词 电化学阻抗；传感器；苯硼酸；糖 1 引 言 糖类在生物体中起着极其重要的作用。它涉及生物学及病理学过程，如信号传导、细胞粘附、癌症 转移等过程，也是生物体进行新陈代谢所需能量的主要来源。1q1。因此，分析检测糖类化合物显得十分 重要。目前，已报道的糖类化合物分析方法有电化学法14J、电化学发光法o、荧光法∞o、石英晶体微天 平法o7I、表面等离子体共振法旧1等。电化学交流阻抗技术 EIS 是利用小幅度交流电压或电流对电极 扰动，测量体系对扰动跟随情况的电化学响应的测量方法。该方法具有频率范围广、对体系扰动小等特 点，是研究电极过程动力学、电极表面现象等的重要工具p’…。。 目前，糖类化合物的检测主要基于糖和与糖可结合分子 如糖结合蛋白、凝集素、硼酸基团等 之问 的弱相互作用[1卜13]。硼酸及其衍生物能与二醇可逆高效地共价结合而形成环状的硼酸酯，因此可将其 作为生物传感器的分子探针来识别糖类化合物¨4“6|。相比糖传感器的其它识别单元，硼酸具有价格低 廉、稳定性好、易可逆再生等优点ⅢJ。已报道的作为分子识别物质检测糖的硼酸有苯硼酸、氨基苯硼 酸、巯基苯硼酸等¨8’19J，其中巯基苯硼酸因易在空气中氧化、室温下不稳定等缺点在生物传感应用方面 受到限制。合成稳定的硼酸类衍生物作为糖传感器的识别单元是糖传感器研究的一个方向Ⅲ1。 本研究选择苯硼酸为糖的识别物质，首先由半胱胺与4．甲酰基苯硼酸反应合成Schiff’s碱，通过自 组装方式将合成的硼酸Schiff’S碱固定于金电极表面，以电化学交流阻抗法为检测技术，构建非标记、灵 敏度高、稳定性好的电化学交流阻抗糖传感器。电极上固定的硼酸可与糖化合物上的二醇可逆、高效地 共价结合形成环状的硼酸酯，利用传感器与糖结合前后阻抗值的变化，分析检测葡萄糖、乳糖和甘露聚 糖，并且分别考察传感器与3种糖的结合能力。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 电化学系统为CHI660电化学分析仪 上海辰华仪器公司 ，电极为三电极体系：工作电极为金电 极 中 2 mm 或修饰电极，对电极为铂电极，参比电极为Ag／AgCl 饱和KCl 电极。 2012．12—18收稿，2013-04-30接受 $E-mail：honglanqi@snnu．edu．cn 万方数据 分析化学 第4l卷 from 半胱胺 Cysteamine，CA，M。 77．15g／m01 、甘露聚糖 MannanSaccharomycescerevisiae，M。 46000 acid，BA，M， 149．94 Da 和4一甲酰基苯硼酸 4一Formylphenylboronic MQ 余所有试剂均为分析纯。实验所用水为Milli—Q超纯水 18．2cm，Millipore公司 。 0．01 mol／L半胱胺溶液的配制：准确称取0．1543 mol／L磷酸盐缓冲液 PBS，pH 7．4 。0．2 g半 mol／L 胱胺，以超纯水溶解并定容至10mL棕色容量瓶，避光保存备用。0．2 4．甲酰基苯硼酸溶液的配 制：准确称取0．30004一甲酰基苯硼酸，用5mL无水乙醇溶解后，加入5 9．0 定 g mL碳酸盐缓冲液 pH mol／L 容至10mL容量瓶备用。葡萄糖、乳糖、甘露聚糖储备液均由0．1 7．4 配