兔抗鸡传染性法氏囊病抗体的制备和纯化.pdfVIP

中国畜牧兽医 2008年第35卷第8期 疾病防治 ·85· 兔抗鸡传染性法氏囊病抗体的制备和纯化 张云现。潘玲，李玉，张静，余为一 (安徽农业大学动物科技学院，合肥230036) 摘要：采用自然发病的传染性法氏囊病(IBD)病鸡的法氏囊组织制作鸡IBD油佐剂灭活苗，用鸡IBD油佐剂灭活苗多点 皮下注射健康成年兔，获得高免兔抗鸡IBDV血清，经过盐析、透析的方法制备高纯度的兔抗鸡IBDV高免IgG。兔血清中抗 体效价为1：128，蛋白质含量为40．3～48．8mg／ml；纯化后效价为1：32，蛋白质含量为18．O～23．0mg／ml。用此试剂对安 抗体，并为临床免疫组化法检测IBDV提供可靠的抗体。 关键词：传染性法氏囊病；高免血清；盐析法；聚丙烯酰胺凝胶电泳 中图分类号：$852．4+3 文献标识码：A 文章编号：167i-7236(2008)08—0085-03 bursaldisease， 传染性法氏囊病(infectious 黑龙江生物药厂(500头份／支)。 1．2 方法 IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的 一种高度接触性传染病。IBDV多损害鸡的免疫器1．2．1免疫原制备采集安徽寿县、肥西、舒城等 官造成免疫抑制，从而造成多种疫苗的免疫失败，给 地共8份疑似鸡IBD病例的法氏囊、脾脏病料组 养禽业造成重大的损失(Van，2000；Giam等，1997； 织，按1：lO(w／v)比例加入灭菌生理盐水，入组织 Lasher等，1997)。近年来由于免疫程序不当、免疫 捣碎机捣碎，装入小离心管内反复冻融5次，12000 密度不够、流行毒株变异与疫苗毒株血清型差异，特 r／min冷冻离心20rain，收集上清。取上清液0．1 别是IBDV超强毒株(vvlBDV)(Cuizz等，2002； Lukert等，1999；Threrry等，2000)和IBDV变异株 原阳性的组织上清液--20℃保存备用。 (Rosenberger等，1989)的出现，造成此病在我国广 取部分组织上清液按1：1000比例(v／v)加入 泛流行，引起普遍关注。琼脂扩散试验(AGP)法和 甲醛溶液，摇匀后置37℃恒温箱作用48h。每隔 免疫组织化学法(immunohistochemistry)(韦平等， 6～8 h振摇1次，以使病毒充分灭活，12000r／rain 2004；王笑梅等，2000；李建荣等，1999)是该病的两 离心20rain，制成组织灭活苗。安全检验合格后按 种重要临床检测方法。这两种方法均需要高质量的 下列方法制成弗氏不完全佐剂：羊毛脂25％+石蜡 抗体，为此，作者采集安徽合肥周边地区临床典型发 油75％+等量灭活苗，将组织灭活苗缓慢滴加到灭 病鸡的病料组织制备鸡IBD油佐剂灭活苗，多点皮 下注射健康成年兔获得兔抗鸡IBD高免血清，利用盐 菌的羊毛脂和石蜡油的混合物中，边滴边研磨，充分 析、透析的方法制备高纯度的兔抗鸡IBD高免IgG。乳化(曹洪敬等，1999)。 l材料和方法 1．2．2高免血清的制备供试兔用自制鸡IBD弗 1．1材料