葎草多糖的含量分析.pdfVIP

关注，其免疫、降糖等活性与其所含单糖、糖醛酸、蛋 2 实验方法 白等成分结构有密切的关系…。本文对律草纯化 2．1 中性糖含量测定 多糖HSW1-4进行气相色谱等测定单糖组分，采用 2．1．1 HSW1-4中单糖组分的分析 GC条件：DB一 斜率校正系数法分析各纯化多糖中的中性糖含量， 530000mm×0．53mm石英毛细管柱；载气：高纯氮 并测定糖醛酸含量及蛋 白质含量，以便进一步研究 气；检测器：FID；程序升温：100~C(5℃／min)一 獯草多糖的化学结构和药理活性。 190oC，190oC(4oC／min)一240℃(10min)；汽化温 1 材料与仪器 度 280oC；检测器260oC。 1．1 材料与试剂 HSW1-4安瓿冲氮封 口酸水解后，离心，上清液 蓰草采于镇江市郊，经本院段国峰副教授鉴定 冻干，即得水解糖样。采用糖腈乙酰法_2制备各水 为桑科植物薇草Humulusscandens(Lour．)Merr．的 解糖样及标准单糖的气相衍生物，内标为肌醇，注入 全草。纯化多糖HSW1一HSW4的制备：药材脱脂后， 色谱仪，分析样品中单糖的种类，并根据峰面积求得 药渣水提醇沉，沉淀离心后，脱蛋 白、透析、冻干，得 各单糖的摩尔比。 粗多糖 HSw。HSW 经 DEAE一52柱、SephadexG- 2．1．2 各单糖标准曲线的制定及样品的测定 结 100柱的不同浓度NaC1液洗脱，依次得主要纯化多 合气相分析的结果，采用改良的硫酸一苯酚法 测 糖HSW1-4，经HPGPC检测均为单一对称峰；HSW1— 定所含单糖的吸收度。以标准单糖浓度 C(g／m1) 4得率分别为5．25％、25．30％、15．10％、7．85％。 为 自变量，吸光度A为因变量作线性回归，分别求 鼠李糖Rha、阿拉伯糖Ara、木糖Xyl、甘露糖Man、葡 得葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、木糖 萄糖Glu、半乳糖Gal、间羟基联苯、糖醛酸，sigma公 的标准曲线。 司；考马斯亮兰试剂盒，南京建成生物研究所；其他 精密配制为200 g／ml样品液，测定吸光度 A， 基金项 目：中国药科大学校青年基金项 目(项 目编号：E0425)。 · 59 · JIANGXIJOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE 按校正系数法结合标准方程计算浓度。 g／ml范围内，吸光度和含量成 良好的线性关系。 2．2 糖醛酸含量的测定 各标准方程如下： 问羟基联苯法 测定吸收度，以标准糖醛酸浓 Ym萄糖 = 0．0054X 一 0．0023，R = 0．9994， 度C(g／m1)为 自变量，吸光度A为因变量作线性 y甘露糖= 0．0068X +0．0351R ： 0．9978 _l__㈡㈡ 川 回归，求得工作曲线回归方程。精密配制为200Ixg y半乳糖=0．0041X+0．0263，R=0．9981，l，术特 ／ml样品液，测定吸光度 A，按标准工作方程计算浓 = 0．0051 +0．0119R = 0．9993 度 。 拉伯糖 = 0．0049 X +0．0277，R = 0．9976，一 2．3 蛋白质含量的测定 Y嗣李糖 ：0．0044X +0．0129R= 0．9971 Bradford法 测定各管的吸收度 A。计算公 可得葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖 、 式：蛋白含量 = (A样品一A空白)×标准浓度／(A标准 半乳糖 的校正