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第２9 卷 第4 期 热 带 作 物 学 报 Ｖｏｌ．２9 Ｎｏ．4 ２００8 年8 月 ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＴＲＯＰＩＣＡＬ ＣＲＯＰＳ Aug ．２００8 利用PCR 方法从苎麻中检测出粉虱传双生病毒 * 冯细华 郭安平 郭运玲 孔 华 贺立卡 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 海口 571101 摘 要 从苎麻植株上采集了叶片呈现花叶和黄绿斑驳并扭曲的 2个病样。用粉虱传双生病毒简并引物对2 个样品进行了PCR检测，结果发现2个样品都能扩增到预期大小的DNA片段。PCR产物经克隆后进行序列 测定，BLAST比对结果表明，此样品的DNA扩增片断序列与Hsinchu番茄曲叶病毒福建分离物（EF125190， EF125191）和台湾分离物（DQ866131）的同源性都为95%，推测侵染苎麻的双生病毒可能是Hsinchu番茄曲叶 病毒。 关键词 粉虱传双生病毒 苎麻 PCR序列分析 中图分类号 S435.63 粉虱传双生病毒（Whitefly-transmittedgeminivirus，WTGV）属于双生病毒科（Geminivirudae）中的菜 [1] 豆金色花叶病毒属（Begomovirus），共包括183个正式种和87个暂定种 。该属病毒的特点是由烟粉虱 以持久方式传播；大多数病毒都由2个单链DNA组分———DNA-A和DNA-B组成，每条长为2.5~2.8kb， 少数病毒为单组分，仅有DNA-A组分。我国目前已发现有番茄曲叶病毒 、番茄黄 [2] 化曲叶病毒(TomatoyellowleafcurlChinavirus)和烟草曲茎病毒(Tobacc 等 。我国自 [3~7] 1983年首次报道发现双生病毒以来，在云南、广西、广东和海南等省区的已相继发现多种双生病毒 ， 表明这类病毒在我国的危害有蔓延和加重的趋势。研究人员已在苎麻上发现苎麻花叶病毒，但未见有 双生病毒侵染的报道。笔者对从海南采集到的表现为典型双生病毒症状的苎麻样品进行了分子检测及 序列分析，旨在为苎麻上病毒病害的防治提供理论和实验依据。 1 材料与方法 1.1 病毒样品的来源 从湖南农业大学田间采集呈现花叶、皱缩、叶片扭曲等症状的苎麻病株，移栽至海南。随机采集2 个发病样品的叶片，L1和L2。 1.2 主要试剂及克隆载体 PCRMasterMix购自TIANGEN公司。pMD19T-Vector购自TaKaRa公司。琼脂糖凝胶回收试剂盒 购自申能博彩公司。 1.3 DNA 提取和PCR 扩增 [3] [8] 采用NaOH法 提取苎麻病叶的总DNA。利用周雪平等 报道的根据双生病毒基因组DNA基因间 隔区及外壳蛋白基因保守序列设计的简并引物PA(5TAATATTACCKGWKGVCCSC3)和PB(5TGGA- CYTTRCAWGGBCCTTC（K=GACA3)或 T；W=A或 T；V=A，C或 G；S=G或 C；Y=C或 T；R=A或 G； B=G，C或T），以提取的苎麻病叶总DNA为模板，进行PCR扩增，引物由上海Sangon公司合成。反应 条件：94℃变性 1min，58℃退火30s，72℃延伸 1.5min，循环35次，最后72℃延伸 15min。PCR反应 以感染粉虱传双生病毒的海南苎麻为检测样品，以健康植株为阴性对照。 冯细华 女，1981年生，在读硕士。研究方向：生物化学与分子生物学。E-mial：fxh1125@163.com *通讯作者郭安平，男，1962年生，博士，研究员，博士生导师。研究方向：植物基因工程，农业转基因生物安全。E-mial：gap211@126.com 收稿日期：2007- 11-26 修回日期：