枯草芽孢杆菌Loq18抗菌蛋白的分离纯化及其对灰葡萄孢的抑制活性.pdfVIP

2015年1月 四川师范大学学报(自然科学版) Jan．．2015 No瑚al V01．38．No．1 第38卷第l期 JoumalofSichuan University(NaturalScience) 8抗菌蛋白的分离纯化及其 枯草芽孢杆菌Loql 对灰葡萄孢的抑制活性 刘 刚1”， 杨 雪1， 梅雪然1， 黎 霞1， 张晓喻1孙， 张 宏1’2 (1．四川师范大学生命科学学院，四川成都61010l；2．四川师范大学植物资源应用与开发研究所，四川成都610101) 摘要：从枯草芽孢杆菌(肋d地s如f池)I棚18的代谢产物中纯化一种抗菌蛋白，并进行理化性质及其对 灰霉病病原菌灰葡萄孢(助f川括ci聊re8)的抑制作用研究．采用柱层析分离纯化抗菌蛋白，应用基质辅助激光 解吸电离串联飞行时间质谱(MALDL／TOF／TOF／Ms)测定分子质量，并对其理化特性进行分析．通过显微观察 法研究其对灰葡萄孢生长的影响，依据对灰葡萄孢生长抑制率与蛋白质量浓度的线性关系建立毒力方程，计 算Ic。值．通过体内接种灰葡萄孢，研究抗菌蛋白对采后草莓和葡萄腐烂率的影响，探究其对灰霉病的抑制活 568．5 性．经测定抗菌蛋白【JPl8的分子质量为8 Da，含有ku、Glu、Asp等14种氨基酸，不含脂基和糖基；具有 明显抑制灰葡萄孢生长的能力，其抑制灰葡萄孢生长的毒力方程为y=0．2140石+13．517，r2=o．9964，Ic加值 为170峭／mL；经抗菌蛋白处理的灰葡萄孢，在显微镜下可观察到菌丝出现原生质囊泡化、变形、断裂．体内抑 制实验表明当对照组果实的腐烂率达到100％时，处理组草莓和葡萄果实的腐烂率分别为60．33％±6．30％ 和45．33％±6．30％．抗菌蛋白LPl8对灰葡萄孢有明显的抑制作用，可造成灰葡萄孢的菌丝出现原生质囊泡 化、断裂、畸形，对采后草莓和葡萄的灰霉病有较明显的抑制效果，可延长其保质期． 关键词：抗菌蛋白；纯化；理化特性；抑菌能力；灰葡萄孢 中图分类号：S43；K826．15文献标志码：A 文章编号：100l一8395(2叭5)0l一0119—07 doi：lO．3969／j．issn．1∞l一8395．2015．01．020 灰霉病是一普遍性的植物病害，由半知菌亚门 在前期的研究中，分离到一株枯草芽孢杆菌 葡萄孢属的灰葡萄孢菌引起．果实成熟前，植株感 Loql8，经初步试验证明，其质量分数30％硫酸铵沉 染灰霉病会导致果实组织软化腐烂，严重影响水果 淀的粗蛋白对灰葡萄孢等5种植物病原真菌具有 生长；果实成熟后，储存和运输时期感染会致使水 显著的抑制作用，且有较好的稳定性一J，分析该蛋 果大量腐烂¨J．生物防治具有能有效控制病害，对 白是一个新蛋白，检索有关文献，没有发现与此蛋 环境无害的特点，将其应用于控制灰霉病引起了广 白分子质量相同的，初步动物毒理实验证明是安全 泛的关注嵋j．芽孢杆菌是自然界分布广泛的非致病 的．本试验研究，在前期研究的基础上，进一步纯化 细菌和植物内生菌，研究表明芽孢杆菌是许多植物 该菌株的抗菌蛋白，对其理化特性进行研究，探讨 病原菌的重要拮抗菌，其能分泌多种抗菌物质．有 此蛋白质对灰葡萄孢的作用机理，考察其抑制草 莓、葡萄采后果实腐烂的效果，为该抗菌蛋白的实 研究表明：地衣芽孢杆菌(Bnc垅粥Zi如肌扣册妇) w10的胞外抗菌蛋白对灰葡萄孢有明显抑制作 际应用提供理论依据． 用、3o，芽孢杆菌(B口c扰w印．)BJ一6的抗菌蛋白对