杂色鲍血蓝蛋白的分离纯化及其酚氧化酶活性研究.pdfVIP

第17卷第1期 中国水产科学 Vol.17 No.1 2 0 1 0 年 1 月 Journal of Fishery Sciences of China January 2010 杂色鲍血蓝蛋白的分离纯化及其酚氧化酶活性研究 1，2 2 1 彭文 ，王江勇 ，丁雪娟 （1. 华南师范大学 生命科学学院，广东 广州 510631；2. 中国水产科学研究院 南海水产研究所，广东 广州 510300） 摘要 ：利用超速离心和 CsCl 梯度离心的方法，从杂色鲍（ Reeve）血淋巴中分离纯化血蓝蛋白（Hcs）， Haliotis diversicolor - - SDS PAGE 检测提取 的血蓝蛋白由 1 种亚基构成，分子量为 400 kD；Native PAGE 电泳检测 2 个亚基（Isoform）分别为 HdH1、HdH2；透射电镜下其四级结构为圆柱体，以多十聚体、二十聚体和少量的十聚体形式存在于血淋巴中。杂色鲍 血蓝蛋白在以邻苯二酚为底物的条件下表现出微弱的酚氧化酶活性（ =25.66 mmol/L），胰蛋白酶和 SDS 能使其酚氧化 K m - [ ] 酶活性增强；以左旋多巴（LDOPA）为底物则不表现出酚氧化酶活性。 中国水产科学，2010，17（2）：52-58 关键词 ：杂色鲍；血蓝蛋白；分离纯化；酚氧化酶活性 中图分类号：Q51　　　　　　　文献标识码 ：A　　　　　　 文章编号 ：1005-8737- （2010）01-0052-07 血蓝蛋白 （Hcs）是广泛存在于软体动物和节肢 在外界诱导因素的刺激下会出现不同程度的暴露， 动物中由多个亚基组成的大分子呼吸蛋白，分子量 进而与特定的底物结合表现出酚氧化酶活性 [10-12] ， [ ] 在 0.5 ～ 8 MD 之间 1 。血蓝蛋白活性部位上的 2 其活性的强弱受物种与诱导因素差异的影响。目前， 个铜离子能够可逆地结合氧分子使其具有运输和储 国内对于节肢动物的血蓝蛋白研究较多，而对于软体 存氧气的功能，在结合氧的条件下呈蓝色，脱氧条 动物血蓝蛋白，尤其是其理化性质的研究甚少 [13-15] 。 [ ] 件下呈无色 2 。节肢动物的血蓝蛋白是由分子量为 杂色鲍 （ Reeve）是中国南方