植物生理学实验设计李桥善.pptVIP

茶多酚含量的测定 李桥善 实验目的 1、学习用酒石酸铁比色法测定茶多酚含量的方法。 2、了解茶多酚在植物抗氧化活性中的作用。 3、对比茶树的老叶和嫩叶中茶多酚的含量。 实验意义 茶叶中茶多酚的含量与季节、维度的高低、老嫩程度等有关。通过实验找到茶多酚含量最多的再来进行茶多酚的提取，会大大提高提取率。 实验原理 茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。是一种重要的天然抗氧化性物质。它是超氧阴离子自由基和羟自由基的强捕获剂，能清除自由基。用酒石酸铁比色法测定植物组织中的茶多酚含量。 实验用具及药品 实验仪器与用具 分光光度计、离心机、研钵、水浴锅、移液管、烘箱、具塞三角瓶 实验试剂 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH6.8） 100μg/ml儿茶素标准液：称取10mg儿茶素，用蒸馏水定容至100ml。 1.5%酒石酸钾铁 实验步骤 1. 分别称取同一颗茶树的老叶和嫩叶各1g，研磨成粉末。分别用50ml沸蒸馏水将粉末洗入2个三角瓶，于沸水浴中浸提20min，过滤，滤渣50ml蒸馏水同样提取一次，分别合并上清液5000r/min离心15min，分别取上清液待用。 2.将茶素标准溶液稀释成0、20、40、60、80、100μg/ml，分别吸取1ml，加0.1mol/L磷酸缓冲液3ml，混匀，加1.5%酒石酸钾铁1ml，用分光光度计测定540nm处的OD值，并绘制浓度-OD标准曲线。 3.分别取样品提取液1ml，按上述同意方法测定540nm处的OD值。 流程图 注意事项 注意：如果提取时间过长，所提的茶多酚会发生氧化反应，转化成其他物质，致使一部分茶多酚丢失。如果提取时间在1~2h对茶多酚含量的影响不大。所以要控制好提取时间。 应用前景 茶多酚具有很强的抗氧化性和生理活性,是人体自由基的清除剂。据有关部门研究证明，1毫克茶多酚清除对人机体有害的过量自由基的效能相当于9微克超氧化物歧化酶 (SOD)，大大高于其他同类物质。茶多酚有阻断脂质过氧化反应，清除活性酶的作用。据日本奥田拓勇试验结果，证实茶多酚的抗衰老效果要比维生素E强18倍。 有助于抑制心血管疾病 茶多酚对人体脂肪代谢有着重要作用。人体的胆固醇、三酸甘油脂等含量高后形成动脉粥样化斑块等心血管疾病。茶多酚有助于使这种斑状增生受到抑制，从而抑制动脉粥化样硬。 有助于预防和抗癌 茶多酚可以阻断多种致癌物质在体内合成,并具有直接杀伤癌细胞和提高机体免疫能力的功效。 有助于预防和治疗辐射伤害 茶多酚及其氧化产物具有吸收放射性物质锶90和钴60毒害的能力。 * 茶素标准液 稀释 0、20、40、60、80、100ug/ml 分别取lml 加0.1mol/L磷酸缓冲液3ml 混匀 1.5%酒石酸钾铁1ml 在540nm处测A 分别取老嫩茶叶1g 研磨 分别加入2个带50ml蒸馏水的烧瓶中 沸水浴20min 过滤 重复提取 滤液于5000r/min离心15min 分别取1ml上清液 重复上述实验 测A值 滤渣 *