川芎嗪预给药对缺氧复氧胎鼠海马神经元SOD、MDA及LDH表达和凋亡的影响.pdfVIP

Medical Journal Guangdong Oct．2013，V01．34，No．20 广东堕兰垫!!竺10月第34卷第20期 ．3111． 川芎嗪预给药对缺氧／复氧胎鼠海马神经元 SOD、MDA及LDH表达和凋亡的影响 郑俊奕，王勇，马武华 广州中医药大学第一附属医院麻醉科(广州510405) 【摘要】 目的 观察川芎嗪对缺氧／复氧大鼠海马神经元超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢 以培养7～9d的胎鼠 酶(LDH)表达和神经元凋亡的影响，探寻川芎嗪的神经元保护原理及其较佳剂量。方法 海马神经元为研究对象，随机分为5组：L组(低浓度川芎嗪60斗g／mL)、M组(中浓度川芎嗪200¨∥mL)、H组 (高浓度川芎嗪800斗∥mL)、C组(川芎嗪浓度0p。g／mL)、N组(正常对照)。除N组外分别加入相应浓度的川芎 h。倒置显微镜 嗪，作用1h后放入90％N，+10％CO。培养箱中诱导缺氧2h，然后放入5％CO：培养箱中复氧24 观察细胞形态学变化，透射电镜观察细胞超微结构变化，分光光度计检测培养上清中MDA、SOD、LDH的含量，流 式细胞仪检测神经元凋亡率。结果缺氧／复氧损伤后L、M、H组MDA、SOD、LDH的含量分别为(3．75±0．26)、 (2．43-t-O．86)、(3．454-0．47)nmol／mL，(30．76±4．28)、(41．534-3．28)、(33．544-5．07)U／mL，(623．71± 102．83)、(276．63±75．59)、(537．804-109．18)U／L，神经元凋亡率为(13．474-3．86)％、(3．654-1．42)、(7．78± 1．72)％，与C组比较差异有统计学意义(P0．叭)。M组与L、H组比较差异有统计学意义(P0．01)。结论 川芎嗪60、200、800 p。g／mL预给药均可不同程度减少缺氧／复氧诱导海马神经细胞的凋亡和坏死，抑制LDH的漏 出，减少MDA的产生，促进SOD的生成。200“g／mL浓度的川芎嗪保护作用最显著。 【关键词】 川芎嗪；海马神经元；凋亡率；超氧化物歧化酶；丙二醛；乳酸脱氢酶 随着医学技术的发展，外科手术的难度和复杂程 半球，显露中间的海马并完整分离，再将海马上附着的 度亦在日益增加，特别是心脏手术／器官移植手术等大 血管和脑膜剥离干净后置入放有含D—Hanks液的培 mL 型手术的较广泛开展，术中患者发生缺血／再灌注性脑 养皿。加入2 0．25％胰酶(胰酶的终浓度是 损伤的风险也随之增大。围术期脑缺血再灌注损伤一 0．125％)，混匀，瓶口用锡箔纸盖上，37℃培养箱内消 直是多学科医生所关注的问题。大量研究已经证明脑 化10min左右，期间每5min轻摇数次。加入同体积 缺血再灌注损伤是一个多因素、多机制、多环节的恶性 种植培养液终止消化，用尖头吸管轻轻吹打细胞数分 级联过程。氧自由基的产生、细胞内钙超载、兴奋性神 钟至液体成米糊状，用150目网筛过滤，收集细胞悬 经递质的毒性作用、蛋白酶激活、炎症反应、线粒体功 100 液；以1 r／rain，离心3min，弃去上清液，用种植培 能异常、蛋白合成及基因表达的变化、细胞凋亡等都是 养液重悬细胞，轻轻吹打，200目不锈钢网，收集细胞 造成缺血性脑损害的因素。丙二醛(MDA)是自由基 悬液。取细胞悬液0．1mL计数。根据计数结果，调整 脂质过氧化反应的最终代谢产物，测定MDA的含量可