不同荧光定量PCR对于HBVcccDNA水平的检测差异对比.pdfVIP

安 徽 医 药　Ａｎｈｕｉ Ｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ　２０１５ Ｊｕｎｅ；１９（６） ·１１０３ · 不同荧光定量ＰＣＲ对于 ＨＢＶｃｃｃＤＮＡ水平的检测差异对比 肖春花 ，张春兰 ，陈伟烈 ，魏绍静１ ２ ２ ２ （１．广东省惠州市第三人民医院感染内科，广东 惠州　５１６００２； ２．广东省广州市第八人民医院肝病一科，广东广州　５１００６０） 摘要：目的　研究对比不同荧光定量聚合酶链反应ＰＣＲ对于乙型肝炎病毒ＨＢＶｃｃｃＤＮＡ水平的检测差异。方法　选择２０ 例 从２００７—２００８年在广州市第八人民医院接受住院治疗的乙肝患者作为研究对象。提取其血清及肝组织进行实验分析，另取 ２份不含ＨＢＶ感染的患者血清和肝组织作阴性对照组。将其中经或未经脱氧核糖核酸酶ＤＮａｓｅ处理的样本分别使用ＨＢＶｃ ｃｃＤＮＡ跨单缺口ＰＣＲ和跨双缺口ＰＣＲ检测。分析ＴａｑＭａｎ探针跨单缺口ＰＣＲ测定 ＨＢＶｃｃｃＤＮＡ 的结果，对比跨单、双缺口 ＰＣＲ测定结果以及不同荧光定量ＰＣＲ的测定结果。分析血清和肝组织中ＨＢＶＤＮＡ与ＨＢＶｃｃｃＤＮＡ病毒载量的关系。结果　 血清及肝组织经过ＤＮａｓｅ消化后的有关拷贝数显著低于未消化者。血清和肝组织跨双缺口ＰＣＲ测定结果较跨单缺口ＰＣＲ 测定结果均显著降低。血清中的ＨＢＶＤＮＡ及ｃｃｃＤＮＡ实验结果均显著低于在肝组织中的测定结果，差异均有统计学意义（均 Ｐ＜０．０５）。阴性对照组经四种荧光定量ＰＣＲ检测后均呈阴性。２０例Ｅ抗原呈阳性的乙肝病人，其机体病毒载量总体趋势为 血清ＨＢＶＤＮＡ 的载量较肝组织更低，差异显著。结论　ＤＮａｓｅ 可有效减少 ＨＢＶｃｃｃＤＮＡ 在检测过程中的假阳性情况，经 ＤＮａｓｅ处理后的跨双缺口ＰＣＲ检测特异性最高。同时，血清中基本不含ｃｃｃＤＮＡ。 关键词：荧光定量ＰＣＲ；ＨＢＶｃｃｃＤＮＡ水平；检测差异；对比 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９ －６４６９．２０１５．０６．０２４ Ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｆｏｒ ＨＢＶｃｃｃＤＮＡ ｌｅｖｅｌｓ ＸＩＡＯ Ｃｈｕｎｈｕａ ，ＺＨＡＮＧ Ｃｈｕｎｌａｎ ，ＣＨＥＮ Ｗｅｉｌｉｅ ，ｅｔ ａｌ１ ２ ２ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｔｈｅ ＴｈｉｒｄＰｅｏｐｌｅ＇ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＨｕｉｚｈｏｕ，Ｈｕｉｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５１６００２，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｔｈｅ Ｆｉｓｔ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＬｉｖｅｒＤｉｓｅａｓｅ，Ｔｈｅ Ｅｉｇｈｔｈ Ｐｅｏｐｌｅ＇ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＧｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５１００６０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲｆｏｒ ＨＢＶｃｃｃＤＮＡ ｌｅｖｅｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　２０ ｃａｓｅｓ ｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｂ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ２００７ ｔｏ２００８ ｉｎ ｔｈｅ Ｅｉｇｈｔｈ Ｐｅｏｐｌｅ＇ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ．Ｗｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅｓｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ａｎｄ ｕｓｅｄ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ２ ｓａｍｐｌｅｓｏｆｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅｓｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｏｕｔ ＨＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｓｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｓａｍｐｌｅｓｗｉｔｈ ｏｒｗｉｔｈｏｕｔ ＤＮａｓｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄｗｉｔｈ ＨＢＶｃｃｃＤＮＡ ａｃｒｏｓｓｄｏｕｂｌｅ ｇａｐ ｏｒｓｉｎｇｌｅ ｇａｐ ＰＣＲｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｗｅ ａｎａ ｌｙｚｅｄ ｔｈｅｔｅｓｔｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｏｆＨＢＶｃｃｃＤＮＡｂｙａｃｒｏｓｓｓｉｎｇｌｅｇａｐＰＣＲＴａｑＭａｎｐｒｏｂｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ，ａｎｄｃｏｍｐａｒｅｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ