微生物转化法生产睾酮的发酵工艺研究.pdfVIP

No．6 亿擘与生物Z程2007，voI．24 囡 ChemistryBioengi舱ering 微生物转化法生产睾酮的发酵工艺研究 陈小明1，黎金旭1。王洪钟2，孟庆雄1 量较高的菌株YHT一103。通过对发酵条件及发酵培养基的优化，获得最佳转化培养基：葡萄糖15g·L_1，硝酸铵4g· o．5 HP040．5 6 h， L～，MgS04g·L～，K2 g·L～，植物甾醇2g·L～，Tween80g·L～，pH值6．5；种子培养时间30 接种量10％，培养温度28℃。在最佳转化条件下，TS转化率最高达46．20％。 关键词：微生物转化；睾酮；植物甾醇；发酵条件；筛选’ 467．91 文献标识码：A 中图分类号：TQ 文章编号：1672—5425(2007)06一0037一04 睾酮(Testosterone，TS)，化学名为17伊羟基～雄植物甾醇主要包括伊谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇， 甾一4一烯一3一酮，是由瑞士Ciba公司研发的激素类甾体是从大豆油和菜籽油精炼副产物脱臭馏出物中分离得 药物[1卫]，临床应用广泛。 到的。作者在研究以植物甾醇为原料合成激素药物原 睾酮的生产方法有两种，一种是以薯蓣皂营为原 料，经过12步反应得到产物；另一种是以雄甾一4一烯一3， 诱变，获得了一株可将植物甾醇转化为TS的高产菌 17一二酮(AD)为原料，经过4步反应得到睾酮。上述株，为了提高该菌株对植物甾醇的转化产率，对其转化 方法需要耗费大量有机溶剂和化工原料，反应复杂，环 条件进行了优化。 境污染大，且要求在无水和低温冷冻条件下进行，总收 1 实验 率较低，需要经过多次重结晶和柱层析，产物纯度才可 达到97％。 1．1 菌种 微生物转化是利用微生物代谢过程中产生的酶对 菌种YHT～1，昆明理工大学生物工程实验室保藏 反应底物进行的某种催化反应。它充分利用酶的高效 该菌用于将植物甾醇转化为AD。 性、专一性和温和性，与传统化学合成方法相比，具有 1．2材料 选择性高、条件温和、成本低和污染小等特点，被广泛 应用于医药原料合成、功能材料和香料等精细化工行 伊谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇和菜籽甾醇)，江苏春之谷 业。由于微生物发酵不需要在大量有机溶剂下进行， 生物制品有限公司；葡萄糖、胆固醇、酵母粉、柠檬酸、 Tween 发酵废液大部分都是多糖、蛋白质和无机盐等，因此， 80等，北京北化精细化学品有限公司；其它无 微生物转化是环境友好型绿色化学过程，所以又被称 机盐均为分析纯。 为绿色生物反应。近十余年来，利用微生物转化进行 1．3培养方法 药物的区域选择性和立体选择性合成成为新的研究热 KH2P04 点‘3。。 0．05，MgS04·7H20o．05，酵母膏0．5，pH 微生物转化法生产睾酮较化学合成方法具有更多 值7．o；28℃，200r·min_1培养2～3d。 的优点：(1)反应简单，只需2步反应；(2)易于工业化 斜面培养基(％)：葡萄糖l，酵母膏l，琼脂粉2， pH值7．O；28℃培养5～8d。 生产，发酵法在28℃条件下进行，条件要求低；(3)产 品纯度高，主要副产物只有AD，可以通过重结晶进行