猪瘟兔化弱毒E2基因重组杆状病毒的构建及抗体制备.pdfVIP

·６ · 中国兽药杂志 ２０１５，４９（１）：６～９／ 范学政，等　 猪瘟兔化弱毒Ｅ２基因重组杆状病毒的 构建及抗体制备 范学政，徐 璐，赵启祖，宁宜宝，邹兴启，朱元源，丁家波，王 琴∗ （中国兽医药品监察所，北京 １０００８１） ＋ － － － － － ［收稿日期］２０１４ １０ ０９　 ［文献标识码］Ａ　 ［文章编号］１００２ １２８０ （２０１５）０１ ０００６ ０４　 ［中图分类号］Ｓ８５２．６５ １ ［摘　 要］　 为制备猪瘟特异性抗体，将猪瘟兔化弱毒Ｅ２ 基因序列修饰后克隆到ｐＦａｓｔＢａｃ１质粒载 体，经转座、转染后构建重组杆状病毒，并用纯化的重组猪瘟Ｅ２ 蛋白免疫大耳白兔制备特异性抗 体。 实验结果表明成功获得能分泌重组猪瘟Ｅ２ 蛋白的杆状病毒，使用纯化的重组猪瘟Ｅ２ 蛋白制 备的猪瘟抗体具有良好的特异性和敏感性，为猪瘟病毒荧光抗体染色液的制备奠定了基础。 ［关键词］　 猪瘟病毒；Ｅ２基因；杆状病毒表达；抗体制备 Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＨＣＬＶ Ｅ２ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ － － － － ＦＡＮ Ｘｕｅ ｚｈｅｎｇ，ＸＵ Ｌｕ，ＺＨＡＯ Ｑｉ ｚｕ，ＮＩＮＧ Ｙｉ ｂａｏ，ＺＯＵ Ｘｉｎｇ ｑｉ， ∗ － － ＺＨＵ Ｙｕａｎ ｙｕａｎ，ＤＩＮＧＪｉａ ｂｏ，ＷＡＮＧ Ｑｉｎ （Ｃｈｉｎａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｐｒｅｐａｒｅａｎｔｉｂｏｄｙｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ ｃｌａｓｓｉｃａｌｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ（ＣＳＦＶ），ｔｈｅＥ２ｇｅｎｅｏｆｖａｃｃｉｎｅ ｓｔｒａｉｎ ｈｏｇ ｃｈｏｌｅｒａ ｌａｐｉｎｉｓｅｄ ｖｉｒｕｓ （ＨＣＬＶ） ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏ ｖｅｃｔｏｒ ｐＦａｓｔＢａｃ１， ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｒａｎｓｐｏｓｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｃａｒｒｉｅｄ ＨＣＬＶ Ｅ２ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ａｎｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｅ２ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ． Ａｆｔｅｒ ｉｍｍｕｎｉｎｇ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｉｔｈ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｅ２ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｂｙ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ，ｔｈｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ＣＳＦＶ ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｃｏｕｌｄ ｓｅｃｒｅｔ Ｅ２ ｐｒｏｔｅｉｎ， ａｎｄ ｔｈｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｈａｄ ｇｏｏｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ ｆｏｒ ＣＳＦＶ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＣＳＦＶ；Ｅ２ ｇｅｎｅ；ＢＥＶ