刺囊酸的生物转化及抗HCV进入活性的研究.pdfVIP

of EA. Fourmetabolites with region- and stereo-selective introduction of hydroxyl, lactone or glycosylation groups at various inert carbon positions were obtained. The anti-HCV entry activity testes indicated that the modification of C-28 site can increase its anti-HCV activity.Further analysis indicated that the hemolytic effect of EA disappeared upon microbial transformation. Keywords: echinocystic acid, microbial transformation, HCV entry inhibitor 三萜类化合物广泛存在于自然界，具有良好的生物活性，被作为抗肿瘤、抗炎、抗糖尿 病等疾病的先导化合物来研究，尤其在抗病毒药物的研究领域，三萜类化合物引起人们越来 越多的重视。羽扇豆烷型五环三萜白桦脂酸显示了良好的抗 HIV 进入并抑制病毒成熟的活 性，bevirimat 是白桦脂酸的衍生物，已经进入临床研究[1,2,3] 。Moronic acid 和 hawthorn acid [4] 属于齐墩果酸型五环三萜，二者也表现出了较好的抗 HIV 活性 。 丙型肝炎病毒（HCV ）感染可导致肝纤维化与肝硬化并最终导致肝癌，目前针对 HCV 的治疗方式主要是采用干扰素和利巴韦林，该治疗方法已经使用近 30 年。直至近年，抗病 毒复制的 telaprevir 和 boceprevir 的出现掀开了丙型肝炎治疗的新篇章[5] 。但是蛋白酶抑制剂 极大地加强了病毒的选择压力，在体内已发现 HCV NS3 蛋白酶有 6 个主要位点[6]、NS5B 聚合酶有 15 个主要突变位点及 NS5A 聚合酶有 5 个主要突变位点发生突变[7]，从而产生耐 药毒株。此外，它们不能减轻原有抗 HCV 药物的副作用，反而可能带来新的副作用，如皮 疹、味觉障碍、贫血加重等。因此，新的抗病毒药物在作用机制上正亟待突破，其中围绕 病毒复制的上游过程 - 病毒进入细胞有可能构成抗病毒药物研发的新契机。以病毒进入细 胞为靶的抗病毒药物研究一旦成功，它不仅具有治疗作用，还能够预防病毒的传播，甚至减 缓由于病毒基因高突变引起的耐药。 利用基因功能技术，我们构建了 HCVpp 及 VSVpp 假病毒抗 HCV 进入药物的模型，并 对一系列的中草药提取物进行了筛选，发现刺囊酸（echinocystic acid, EA ）有抗HCV 进入 的活性，并进行了系统的结构修饰及构效关系的研究[8] 。由于天然五环三萜母核结构稳定， 采用化学方法对其功能团进行修饰的位点有限，因此我们尝试采用生物转化的方法对其进行 结构修饰，期望可以通过这种方法得到结构多样的转化产物，便于对 EA 抗丙型肝炎的活性 进行构效关系的研究。生物转化是利用活体生物或生物体系产生的酶对底物进行结构修饰的 技术。由于生物转化具有很强的区域和立体选择性，生物转化对于具有复杂、稳定结构的天 然产物的结构修饰具有重要作用。在前期实验中，我们选取链格孢 Alternaria alternate AS 3.4578 和华根霉 RhizopuschinensisAS 3043 对 EA 进行了生物转化放大实验，共得到了 14 个 转化产物，并对其进行抗 HCV 的活性测试，总结了构效关系[9] 。在此基础上，我们进一步 选取总状共头霉 Syncephalastrumracemosum AS 3.264 对 EA 进行了生物转化的研究，从中分 离并鉴定了四个转化产物，分别为 3β,16α-dihydroxy-olean-11,13(18)-dien-28β-oic acid-21β lactone (2), 1β,3β,16α-trihydroxy-olean-12-en-28β-oic acid (3), 1β,3β,16α-trihyd