烟草tga1a基因的表达对外源基因在植物中表达的影响.pdfVIP

( C 辑) 第32 卷 第4 期 SCIENCE IN CHINA ( Series C ) 2002 年8 月 烟草tga1a 基因的表达对外源基因在植物中 表达的影响* 路子显 常团结 李旭刚 徐军望 李慧芬 陈宛新 冯德江 肖桂芳 朱 祯** ( 中国科学院遗传研究所, 北京 100101) 摘要 烟草DNA 结合蛋白TGA1a 可特异地作用于CaMV35S 增强子的激活序列as- 1(83~63), 并表现为转录激活功能. 为了研究 tga1a 基因的表达对外源基因在植物中 表达的影响, 将它置于维管束特异性启动子 rolC 下游, 并与 CaMV35S 启动子控制的 报道基因串联成一种反式调控系统, 构建了植物表达载体, 同时, 以CaMV35S 和 rolC 分别控制的报道基因构建植物表达载体为阳性对照. 通过农杆菌介导方法转化烟草和 分子鉴定, 证明报道基因存在于转化烟草基因组中, 分别测定了不同转基因单株的 GUS 活性, 结果表明: rolC 控制下的tga 1a 的表达显著增强了CaMV35S 控制下的报道 基因表达, 其GUS 活性明显高于CaMV35S 或rolC 单独调控报道基因的转化植株, 单 株的最高 GUS 活性达到两个阳性对照的 10 倍以上. 组织化学定位证实该串联系统使 GUS 蛋白主要集中在维管束组织. 这一研究结果为提高外源基因在转基因植株中的表 达水平和外源基因的组织特异性表达创立了一个新模式. 关键词 基因表达与调控 DNA 结合蛋白TGA1a 植物转化 报道基因 在植物基因工程研究中, 提高外源基因在植物细胞中的转译水平十分重要, 但是外源基 因在转基因植物中的组织特异性表达也非常必要. 因此, 建立高效和组织特异性表达调控系 统具有重要意义. 反式作用因子是位于不同染色体或同一染色体较远位置上的基因编码的蛋白质因子, 含有一 个DNA 结合结构域, 能与特定的DNA 序列结合, 也称DNA 结合蛋白. 通过突变研究 顺式 作用元件分析和对已知因子的同源性分析 3 条途径, 迄今已分离了许多种编码植物反式作用 因子的基因. 碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper, bZIP) 蛋白是真核转录因子和阻抑蛋白中最 保守的类型之一, 在植物中, bZIP 蛋白控制种子贮藏基因表达 光形态发生和器官建立. 植物 bZIP 蛋白有多种类型, 根据它们的 DNA 结合专一性和氨基酸序列, 植物 bZIP 蛋白可分为 3 个主要类型: 偏爱 G-box(CCACGTGG) 偏爱 C-box(TGACGTCA) 对 G-box 和 C-box 具有 相同的亲和力. TGA1a 属于强专一性C-box 结合蛋白, 是从烟草中分离到的反式作用因子, 由 359 个氨基酸残基组成, 分子量40.7 kD, 有一个富含丝氨酸的(酸性激活区) 区域, 一个碱性区 [1] (DNA 结合区)和一个亮氨酸的拉链区 . TGA1a 能与CaMV35S 启动子中as-1(含TGACGT 重 复序列的21 bp 区, as-1)序列结合, 将as-1 序列与rbcS3A 基因串联后, TGA1a 使本应只在叶 [2] 中表达的基因同时在根部表达 . 利用小麦幼芽转录系统来测试 TGA1a 与 CaMV35S 启动子 的表达关系发现,