去甲斑蝥酸钠对耐顺铂肺腺癌A549DDP细胞逆转的分子机制.pdf

浙江 医学 2010 年第 32 卷第 4 期 去 甲斑蝥酸钠对耐顺铂肺腺癌 A549/DDP 细胞逆转的分子机制 蒋亦燕 施畅 杨晓蕾 全世超 徐丽华 【摘要 】 目的 探讨去 甲斑蝥酸钠（SNCTD ）对耐顺铂人肺腺癌细胞系 A549/DDP 的逆转作用及可能分子机制。 方法 （1 ）采 用 CCK 法筛选出 SNCTD 对 A549/DDP 的无毒浓度(即对细胞抑制率 ＜10%的药物浓度) ，并检测 出顺铂及与无毒浓度 SNCTD 联合 对耐药细胞株 的半数抑制浓度（IC50 ）；（2 ）采用流式细胞仪分别检测 1、2 倍无毒浓度 SNCTD 对细胞 内罗丹 明 123 的蓄积情况 ；（3 ） 采用逆转录 - 多聚酶链反应 （RT-PCR ）检测 1、2 倍无毒浓度 SNCTD 处理细胞 48h 后耐药相关基 因 mdr1mRNA 、MRP1mRNA 、 GST-PimRNA 表达 ，并检测药物处理 72h 后 GST-PimRNA 的表达。 结果 （1 ）SNCTD 对 A549/DDP 的无毒浓度为 5 μg/ml ，无毒 浓度 SNCTD 与顺铂联合应用可使 A549/DDP 细胞对顺铂 的 IC50值下降为 4.32 μg/ml ，逆转倍数为 1.97 倍 ；（2 ）无毒浓度 SNCTD 处理耐药细胞 48h 后细胞 内罗丹 明 123 荧光强度 明显增强（P0.05 ）；（3 ）5 、10 μg/mlSNCTD 处理耐药细胞株 48h 后 mdr1mRNA 、 MRP1mRNA 表达均 明显减弱（P ＜0.05) ，而且 10 μg/mlSNCTD 处理组减弱强度亦 明显大于 5 μg/mlSNCTD 处理组（P ＜0.05 ），呈 现浓度依赖性 ；而 GST-PimRNA 表达并无明显变化（P ＞0.05 ），72h 后 GST-PimRNA 表达也未 出现下降（P ＞0.05 ）。 结论 SNCTD 可以逆转 A549/DDP 细胞的耐药作用 ，其作用机制可能与下调耐药相关基 因 mdr1、MRP1 的表达 ，影响膜蛋 白外排泵功能有关。 【关键词 】 去 甲斑蝥酸钠 A549/DDP 细胞 多药耐药 逆转 耐药相关基 因 ThereverseeffectofsodiumnorcantharidateonhumanlungadenocarcinomacelllineA549/DDPJ IANG Yiyan ， SH I Chang ， YANG Xiaolei， et al. Department of General Practice ，the First Affiliated Hosp ital of Wenzhou Medical College ，Wenzhou 325000 ,China 【Abstract】 Objective To investigatethe reverse effect and mechanism of sodium norcantharidate (SNCTD) on human lung adenocarcinoma cell lineA549/DDP. Methods The innoxious concentration (lessthan 10 percent of cell inhibition ratio) of SNCTDwas screened by CKK assay and IC50of cisplatinwas measured;the drug-resistantA549/DDP cellsweretreatedwith innoxiousconcentrationofSNCTDwithcisplatin.Theaccumulationeffectof Rh123wereassayed byflowcytometryaftertreated with 1 and 2 folds non-toxic concentration of SNCTD for 48h. PT-PCR w