小牛凝乳酶原基因在乳酸克鲁维酵母中的表达及遗传稳定性研究.pdfVIP

29,No．07297 ※生物T程 目晶科宇 2008,VoL 小牛凝乳酶原基因在乳酸克鲁维酵母中的 表达及遗传稳定性研究 冯镇1，张兰威：·· (1．东北农业大学食品学院，黑龙江哈尔滨 150030； 2．哈尔滨工业大学食品科学与工程学院，黑龙江哈尔滨 150090) 摘 要：目的：构建小牛凝乳酶原乳酸克鲁维酵母分泌型表达载体，表达重组凝乳酶原。方法：通过PCR获得 小牛凝乳酶原cDNA片段，将目的基因插入酵母表达载体pKLACl仅结合因子分泌信号下游，得到重组载体 基筛选转化酵母菌，PCR鉴定目的基因，利用特异性引物筛选多拷贝转化子。阳性转化子经摇瓶表达，取上清 TCA沉淀后做TricineSDS．PAGE分析并检测凝乳酶的活力，通过检测阳性转化予产凝乳酶的活力考察其遗传稳定 性。结果：经测序及PCR证实，凝乳酶原eDNA准确插入酵母表达载体pKLACl中，转化后重组载体通过同源 重组整合进入酵母基因组中。TricineSDS．PAGE分析证明凝乳酶的分子量约为36kO，酸处理后测得培养基中凝乳 养基中获得分泌的重组凝乳酶原，经过酸处理后凝乳酶原转化为有活性的凝乳酶。 关键词；乳酸克鲁维酵母；凝乳酶；分泌表达 on of in lactisandGenetic StudyExpressionProchymosinKluyveromyces Stability FENGZhent。ZHANGLan．wei2·o ofFood Science，Northeast 150030，China； (1．College AgriculturalUniversity，Harbin ofFood Scienceand Institute 150090，China) 2．College Technology，HarbinofTechnology，Harbin construct vectorand recombmant Abs打act：Objective：ToKluyvermyces跏出secretedexpression express prochy’mosin． theninserted Methods：The mature was chainreaction，and prochymosingeneencodingpeptideamplifiedbypolymerase intothedownstreamofthe factor ofthe lactis vector alpha-matingsignal Kluyvermycesexpression was lactisstreanGG799withlithium line缸izcdSaclIandtransformedinto plasmidpKLACl-prochy’mosinby