改良CTAB法提取鸢尾属植物DNA.pdfVIP

现代农业科技 圆园11年第8期 农业基础科学 改良CTAB法提取鸢尾属植物DNA * 李承哲 刘占林 杨红超 黄安玲 刘 芳 渊西北大学生命科学学院袁陕西西安 710069冤 摘要 鸢尾属植物中酚类尧多糖含量较高袁DNA提取较为困难遥在前人工作基础上袁改进了提取植物DNA的CTAB方法袁通过延长水 浴时间尧氯仿/异戊醇渊24颐1冤2次抽提尧适当延长氯仿/异戊醇与提取液接触时间等一系列改进袁简化了提取步骤袁大大缩短了提取时间遥所提 取的DNA纯度高袁可满足以PCR扩增为基础的试验需要遥 关键词 鸢尾属曰DNA提取曰改良CTAB法曰PCR + 中图分类号 Q781曰S682.19 文献标识码 A 文章编号 1007-5739渊2011冤08-0031-01 DNA Extraction from Iris Species with Modified CTAB Method * LICheng-zhe LIUZhan-lin YANGHong-chao HUANGAn-ling LIUFang 渊CollegeofLifeSciences袁NorthwestUniversity袁Xi忆anShaanxi710069冤 Abstract DNAisolationofIris speciesisdifficultfortheirhighcontentsofpolyphenolandpolysaccharide.HereamodifiedCTABmethodforIris DNA extraction was presented.With series of improvement and simplification of the procedure袁including water-bath time extension袁chloroform/ isoamyl alcohol渊24颐1冤twice extraction袁high concentration andpurity of DNAwas obtained andit could be used in the following molecular biology experimentsbasedonPCRamplification. Keywords Iris曰DNAextraction曰modifiedCTABmethod曰PCR 随着分子生物学技术的发展袁快速尧经济地从植物样品 中预冷无水乙醇曰榆在4益冰箱中预冷70%乙醇遥 中提取高产量尧高纯度的基因组DNA已成为植物分子生物 1.4.2 操作要点遥具体如下院淤称取0.2g幼嫩叶片置于灭菌 学研究的首要问题遥鸢尾属渊Iris冤植物中酚类尧多糖含量较 干燥钵中袁加入约30mL液氮袁轻轻捣碎叶片遥等液氮即将 高袁DNA提取较困难遥目前袁提取鸢尾属植物DNA的方法按 挥发完时袁快速研磨至粉状渊越细越好冤袁把粉末转移至有标 裂解剂的不同主要分为CTAB法和SDS法遥但采用 CTAB 号的2mLEppendorf管中遥于向管中加入800滋L65益预热 [1-2] 法 提取出来的DNA 由于产量低尧易降解等问题袁无法达 的CTAB提取液遥盂将Eppendorf管置于65益水浴锅中袁保 [3] 到预期效果曰SDS法 虽操作简单尧温和袁但费时袁且不能有 温50min袁每隔5min用手轻微颠倒混匀 1次遥榆取出样品