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无花果残渣中黄酮类物质提取技术研究 王振斌马海乐 (江苏大学) l前言 为骨架的2-苯基色原酮。它的存在形式有两种，一种是游离的苷元．另一种是与糖等结合的苷。黄 酮具有很多重簧的生理功能．如抗肿癯、延缓衰老、增强b血管功能、治疗慢性前列腺炎、增强免 疫力、调节内分泌系统、护肝、抗炎、抗过敏、抑茁、抗病毒等“瑚。目前国际上对黄酮类化合物的 研究开发十分活跃．其中对黄酮提取工艺的研究是一个重要的内容。黄酮的提取方法有”’1：热水提 取法，碱性水或碱性稀醇提取法．微波辅助萃取，超声波辅助萃取，酶解法，大孔树脂吸附法， 超滤法，超临界流体萃取法．有机溶剂提取法等。其中有机溶剂提取法是国内外使用最广泛的方 法，主要用于提取脂溶性基团占优势的黄酮类物质．有机溶剂主要用乙醇、甲醇、乙酸乙酯、 乙醚等，最常使用的溶剂是乙醇，即酵提法。本法对设备要求简单，产品得率高，但成本较高． 杂质含量也较高。 无花果黄酮类物质是无花果功效成分之一，含量约为1．34％。目前没有见到关于无花粜黄 酮类物质提取的研究报道，笔者以无花果残渣经过sc-c(h萃取后剩余的二次残渣为原料，在 预备试验的基础上。本试验选用不同浓度的乙醇为溶剂，采用二次正交旋转组合计的方法。研 究了二次残渣中黄酮类物质的提取方法，并进一步研究了无花果黄酮的抑瘤作用，对于延长无 花果加工的产业链和提高农业加工的综合效益具有积极的意义。 2试验材料和仪器 2．1试验材料 无花果残渣，江苏省丰县中研无花果开发有限公司提供；肿瘤细胞株：SGC．7901(人胃癌 细胞株)．江苏大学医学技术学院提供，并在本室长期传代培养，细胞生长于含DMEM、谷氨 酰胺、碳酸氢盐及lO％d,牛血清的培养液中．每间隔48h更换一次培养基，试验时，以一定的细 公司；芦丁标准品，上海生化制剂厂；95％食用乙醇，氢氧化钠(分析纯)．镇江华东化玻有限 公司。 2．2试验仪器 WFJ7200型可见分光光度计．尤尼柯(上海)仪器有限公司；HH恒温水浴锅，江苏中大仪 ．23． 公司。 3试验方法 3．1芦丁标准液的配制与标准曲线的绘制 匀，放置6min；加入10％的№oH10mL．加蒸馏水至豪4度，摇匀，放置15min，以相应试剂溶液 做空白对照，于波长510nm处测定吸光度。 以吸光度(0D)为横坐标，以芦T浓度(mg／mL)为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程： C=0．08901)+0．001 (1) 式中：C一黄酮浓度(mg／mL)，oD一反应液于510ha处的吸光度。 范围时吸光度与芦丁浓度之间的关系。 3．2提取物中总黄酮含量的测定 吸取一定量的样液于25mL的容量瓶中，按照(3．1)中步骤操作，测定并计算其总黄酮含 量。 3．3四元二次正交旋转组合试验方案设计 采用四元二次正交旋转组合试验方案设计对无花果残渣黄酮类化台物提取技术进行研究““ 2““。根据专业知识确定试验因素为：乙醇浓度(xI)，料液比(XO，提取时闻(】(3)，提取 温度(‰)。四个因素的水平编码见表1 表1各因素水平绽码表 -24- 3．4提取方法 称取试样109，按表2q636个方案热回流提取．过滤，残渣用相应浓度的乙醇洗涤，定容提取 液200mL待测。 3．5无花果黄酮抑瘤试验 采用MTT法I””馐行试验。试验时，用胰酶消化液进行消化SGC一7901细胞，用无血清的培 养液离心洗涤两次。取对数生长期的细胞，细胞数调接为4×104个／mL，自n．,x．96：fL扳中，每孔90 pL。阴性对照为笛体积的 pL。细胞在培养箱中放置lh，使其贴壁后再加待测样品，每：fklo u 丙酮(样品稀释时也采用丙酮稀释)，无花果黄酮的终浓度为30、50、100、200g／mL，细胞