CIK细胞免疫活性细胞.docVIP

CIK细胞免疫活性细胞CIK细胞 CIK细胞是一种新型免疫活性细胞，它是自体外周血单个核细胞，经多种细胞因子共同诱导培养产生的一类CD3+和CD56+共同表达的高细胞毒细胞（杀伤细胞）。它是由美国斯坦福（Stanford）大学最先研制的，兼有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和自然杀伤细胞（NK）的非主要组织相关性复合物（MHC）限制性杀瘤的特点，杀伤活性可达84.7%。 CIK细胞具有增殖快、杀瘤活性强、杀瘤谱广的优点，尤其是对化疗耐药的肿瘤细胞株亦有杀伤作用，而对正常造血集落的生长没有影响。通过取病人少量单个核细胞，在体外特定条件下制备出大量CIK细胞，回输体内后直接发挥有效清除肿瘤作用。 CIK细胞的特点 1、增殖能力强，主要效用细胞CD3+CD56+ 可增殖1000倍； 2、杀伤活力强，远优于传统的LAK细胞和细胞因子γ干扰素、白细胞介素2等； 3、杀瘤谱广，不受MHC限制，具有广谱杀肿瘤和病毒的作用，对多重耐药肿瘤细胞仍敏感，杀瘤活性不受环孢素A（CsA）和FK506等免疫抑制剂的影响，能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL凋亡。 4、毒副作用小，无严重不良反应。CIK细胞增殖、表型变化和杀伤活性影响方法：采集人外周血单个核细胞，标本分为两组，对照组加入IFN-γ、IL-2、IL-1α、CD3mAb等细胞因子诱导其增殖，实验组另外加入 RetroNectin诱导，倒置显微镜下观察培养过程中细胞形态变化，采用活细胞计数法观察CIK细胞增殖，分别绘制细胞增值曲线；流式细胞术检测 CIK细胞培养过程中的表型变化；LDH法检测CIK细胞对肿瘤细胞K562细胞和PC-3细胞的杀伤活性；采用AnnexinV/PI染色，流式细胞术 检测细胞凋亡情况；流式细胞技术检测不同培养条件下第4d、7d、11d及14d的CIK细胞周期。 结果：PBMC在体外经过多种细胞因子的诱导后，能大量扩增生成CIK细胞，培养14天，扩增倍数可达96.13±5.03倍；CIK细胞中的 CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例随培养时间的延长较PBMC明 显增多；细胞的百分率则逐渐下降； CIK细胞对K562细胞和PC-3细胞均有较强的杀伤活性，两者相比较，差异无统计学意义，并且随着诱导时间的延长，这种杀伤活性增强，在诱导培养的第 14d杀伤活性最强。经RetroNectin刺激14天后的RN-CIK细胞扩增倍数可达330.46±7.96倍，培养的第7天起明显高于普通培养方 法；自培养的第7天，RN-CIK细胞中的CD25±细胞比例较普通培养的CIK细胞明显增多。但两种培养方法对CIK细胞的 CD3+CD8+、CD3+CD56+、 CD3+CD4+表型及细胞杀伤活性的影响无明显差异。在培养的第11d，RN-CIK细胞与普通培养的CIK细胞 凋亡率无明显差异。S期细胞的比例随所培养时间的延长逐渐升高，在培养的第7d达到最高，并且RN-CIK细胞中S期的细胞比例明显高于普通培养的CIK 细胞组。 结论： (1)体外应用抗人CD3单抗、人重组IL-1α、人重组IFN-γ和人重组IL-2能诱导PBMC生成CIK细胞，CIK细胞对K562细胞和PC-3细胞均有较强的杀伤活性。(2)RetroNectin可以明显增加CIK细胞的扩增倍数，但是对CIK细胞的表型变化及杀伤活性影响不大。 (3)RetroNectin能促进细胞增殖的可能机制：促进细胞之间的黏附，增强信号传导；诱导T细胞活化；抵抗活化细胞凋亡；促使细胞由G1期进入S期。