感染性疾病的基因诊断.ppt

感染性疾病的基因诊断 重点介绍两个内容 分子诊断学 感染性疾病的基因诊断 第一节 分子诊断学 现代生物学和现代医学研究都已经证明，除外伤和非正常死亡以外，人类所有疾病的发生、发展和转归都与遗传物质(DNA)的直接或间接变化相关，这标志着现代医学的发展已逐步进入“基因组医学”时代。 而基因组医学对疾病诊治的首要贡献便是“预测医学”(predictive medicine)。所谓预测医学就是在受精卵及其卵裂期、胚胎期、胎儿期、婴幼儿期或个体发病前期对遗传物质(DNA)的直接或间接变化进行分析，以识别出疾病相关基因的结构异常或功能异常或识别出发病风险基因的携带者，从而进行有效的预防和治疗。 很显然预测医学是以分子诊断(molecular diagnosis)技术为基础的。人类常见的遗传性疾病有150～200种，较为罕见的疾病有600～800种，它们可能与人类30000～40000个基因中的几千个基因相关。 人类基因组DNA全序列数据的公布以及几十种细菌、啤酒酵母、秀丽线虫、黑腹果蝇、拟南芥等多种模式生物全基因组序列测定的完成，都为人类遗传病和感染性疾病的分子诊断奠定了基础。 一、分子诊断学的发展 现代预测医学—分子诊断的诞生可追溯到1978年，著名美籍华裔科学家简悦威(YuetWai Kan)首先应用液相DNA分子杂交技术对镰刀形细胞贫血(?S)实现了产前基因诊断。 诊断的基本原理 某一疾病的基因与某一遗传性标志连锁在一起，当时的遗传性标志就是限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphisms，RFLPs)，即不同个体的DNA用同一限制酶切割产生片段的大小可不同，而这种不同与某种疾病或疾病的基因连锁在一起，从而间接地诊断疾病。 这之后，基因诊断技术虽然只有短短的20多年历史，但对疾病诊断学的影响作用却是革命性的。遗传标志从第l代的RFLP，到第2代遗传标志(短串联重复序列)，到第3代遗传标志(单核苷酸多态性：SNP)，到直接检测基因；分析的层次从DNA到RNA到蛋白质； 分析的方法 ①DNA液相杂交和固相点杂交； ②基因限制酶酶谱分析； ③限制性片段长度多态性连锁分析； ④RNA杂交； ⑤PCR体外扩增； ⑥荧光原位杂交(fluorescence insitu hybridization，FISH)； ⑦DNA测序； ⑧生物芯片(DNA chip)技术； ⑨蛋白质印迹； ⑩免疫细胞化学 使传统的基因诊断(DNA诊断)概念发展到更全面的分子诊断(DNA诊断、RNA诊断和蛋白质诊断)的新概念。 1999年3月，美国医学委员会(ABMS)批准美国医学遗传学委员会(ABMG)和美国病理学委员会(ABP)创立一项旨在推动美国分子诊断的认证资格培训计划：分子遗传病理学(MGP)，要求MGP的地位必须等同于医学及人类遗传学和病理学。申请MGP培训的医师必须拥有MD或DO博士学位，并已经获得医学专业委员会颁发的行医资格认证，等等。1999年11月，美国病理学会创办的《Joumal of Molecular Diagnostics》杂志正式出版，标志着分子诊断的发展掀开了新的一页。 二、分子诊断的常用技术 分子诊断的基础是分析被筛查者的组织细胞、毛发、抗凝血或干血迹，甚至甲醛(福尔马林)固定、石蜡包埋的组织中的基因。 目前用于分子诊断的技术主要包括PCR-STR、原位PCR、FISH、RT-PCR、PCR-RFLP、PCR-SSCP、多重PCR、定量PCR、DNA测序、DCGE、异源双链分析、化学裂解和酶裂解错配分析、蛋白截断测验、质谱法(mass spectrometry)以及DNA芯片等。 1．Southern印迹技术 Southern印迹是分析DNA结构的一种技术，由于人体内除了红细胞外几乎所有的细胞均可分离到足量的供Southern分析的DNA，所以用Southern印迹技术可对缺失、重复及点突变引起的疾病诊断。 2．Western印迹技术 Western印迹技术是检测特定的蛋白质的方法。X连锁隐性遗传的Duchenne肌营养不良(DMD)是由于基因缺陷而使肌细胞增强蛋白(dystrophin)合成异常，用Western法可检测患者肌细胞增强蛋白，从而对DMD及症状较DMD轻的进行分子诊断 3．PCR技术 PCR技术及在此基础上发展起来的RT-PCR、PCR-RFLP、PCR-SSCP、多重PVR、定量PCR等技术已成为目前进行分子诊断必不可少的技术。α珠蛋白生成障碍性贫血的各种类型中以Bart胎儿水肿综合征最为严重，本病患者两条16号染色体上的4个。基因均有异常。用两段核苷酸PCO1，和PC02作为