体外法评定玉米青贮与稻秸之间组合效应的研究.docVIP

体外法评定玉米青贮与稻秸之间组合效应的研究 我国人口众多，人均耕地面积少，为数不多的天然草场又面临沙漠化和过度利用，有限的耕地又不能用于大面积种植优质牧草，加之现在饲料和一些优质牧草（如：羊草、苜蓿）价格飞涨，这样，为降低生产成本，就不得不考虑价格低廉的秸秆的有效利用。秸秆的组合利用已经被国内外许多学者进行过深入的研究，如何利用饲料间的组合效应利用稻秸目前研究的还相对比较少，本试验以充分利用稻秸为基础，从营养学角度通过对稻秸、青贮玉米之间不同组合，利用发酵产气营养特性的评价，旨在为合理利用稻秸，在满足奶牛营养需要的前提下，降低生产成本，提高农作物秸秆利用率提供参考。1 材料与方法1.1 体外消化代谢试验1.1.1 试验材料体外批次培养发酵用的干稻秸和青贮玉米,均取自黑龙江省农垦854农场，精料为哈尔滨远大牧业“奶牛产奶期精料880”全价精料补充料。青贮玉米采用冻干法(MCFD 5505冻干机)，稻秸采用常规干燥法，粉碎过40目筛,备作常规化学成分分析与体外产气试验。1.1.2 试验设计体外试验采用单因子6处理重复试验设计,发酵底物:0.4 g精料+0.6 g粗饲料(玉米青贮+稻秸),其中玉米青贮与稻秸分别以100：0(CS100)、80：20(CS80)、60：40(CS60)、40：60(CS40)、20：80(CS20)与0：100(CS0)的比例组成6个组合,进行体外批次培养产气试验，记录4、8、12、24、36、48 h产气量、pH值、消化率和菌体蛋白生成量,在进行批次培养时,每个样品设3个重复,同时设1个空白对照组。1.1.3 瘤胃液供体动物及日粮自东北农业大学实验场选3只体况良好、体重(35±3) kg、安装有永久性瘤胃瘘管的绵羊供采集瘤胃液。日粮的精粗比为4：6，以羊草840 g/d为基础饲料，按干物质计补充40%的精料补充料，即360 g/d。精料补充料的组成及营养水平见表1。日喂2次（8：00和18：00），自由饮水，常规光照。1.1.4 体外批次培养试验1.1.4.1 体外批次培养装置根据体外培养原理，借鉴Menke的传统方法和Theodorou等建立并经Mauricio等改进的压力传感器体外产气技术(Reading Pressure Tech-nique,RPT)的方法,自行设计体外产气装置，装置由若干120 ml的产气瓶、U型压力计、打孔瓶塞、普通医用20 ml注射器、橡胶管及恒温培养箱等组成,每批可培养35个样品。该体系是利用U型压力计的压力差，通过调整注射器使度数前后都为同一标准大气压，此时注射器内所产生的读数差即为所产生的气体体积。为了防止培养底物挂壁，底物装入尼龙袋，再把尼龙袋投入到培养瓶中进行培养。本装置的最大特点为：测量准确（精确至1 ml气体），价格低廉。1.1.4.2 培养液配制试验所用培养液按照Mauricio等介绍的方法配制。使用的培养液组成如下。微量元素溶液(A)：准确称取13.2 g CaCl2·2H2O、10.0 g MnCl2·4H2O、1.0 g CoCl2·6H2O与8 g FeCl3·6H2O，将其混合加蒸馏水溶解,定容至100 ml。缓冲溶液（B）：准确称取4.0 g NH4HCO3与35 g NaHCO3,加蒸馏水溶解,定容至1 000 ml,该溶液在使用前一天配制待用。常量元素溶液(C):准确称取5.7 g Na2HPO4、6.2 g KH2PO4与0.6 g MgSO4·7H2O，加蒸馏水溶解，定容至1 000 ml,该溶液在使用前一天配制待用。指示剂溶液(D)即0.1%的刃天青溶液:准确称取100 mg刃天青溶解于100 ml蒸馏水即可。还原剂溶液(E)：准确称取6.25 g Na2S·9H2O 溶解于95 ml蒸馏水中，然后再加入1 mol/l NaOH 4 ml，现用现配。1.1.4.3 缓冲液制备依次向520 ml蒸馏水中加入208 ml缓冲溶液(B)、208 ml常量元素溶液(C)、0.1 ml微量元素溶液(A)、1.0 ml刃天青溶液(D),通入二氧化碳使溶液饱和,置于39 ℃恒温水浴箱中保存,加入62.4 ml还原剂溶液(E),持续通入CO2气体约30 min,此时溶液由淡蓝色转变为无色,表明此培养液可用。还原剂溶液(E)于培养前1 h配制。1.1.4.4 瘤胃液的采集根据虹吸原理,于晨饲(8:30)前2 h用导管经瘤胃瘘管自3只体重（35±3） kg的绵羊瘤胃抽取足量瘤胃液,灌入经预热达39 ℃并通有CO2的保温瓶中,立即盖严瓶口,迅速返回实验室。1.1.4.5 批次培养操作步骤准确称取约（1 000±10） mg已按要求粉碎的待发酵底物置于产气瓶中，然后加入60 ml上述配制好的培养液，再向产气