DHA高产裂殖壶菌EST文库的构建和分析.pdfVIP

辽宁·土哇 套国海洋生番杖术与痒耳焉■学术套议论文善 2006．8．2-6 奎尼酸主要都是从一些植物中提取，如从八角茴香、金鸡纳皮、烟草叶、胡萝h叶。不过，提取率和 分离成本较高(Frostet甜，，1998)。也可用化学合成的方法生产莽草酸和奎尼酸，然而，在合成过程中 会使用和产生一些有害试剂和废物．不利环保。通过基因工程的手段构建可发酵生产莽草酸和奎尼酸 的工程菌应是一个重要的研究方向。特别是代谢工程技术的发展，可通过DNA重组、基因打靶(定向 突变)等技术，进行生产菌的定向育种，并打破种属界限，集中不同菌株的优点，从而选育出高产、 优质、易于大规模生产发酵的基因工程菌。 此外，也可利用E．cofi合成奎尼酸。目前认为莽草酸途径是一个拥有许多分支点的代谢树(Bently, 1990)．从这个代谢树上的一个分支点3一脱氢奎尼酸(DHQ)能够合成目标产物奎尼酸，具体做法可以 在构建Ecall工程菌时，构建aroB和qutB基因串联表达重组子，筛选理想的合成奎尼酸的工程菌。 DItA高产裂殖壶菌EST文库的构建与分析 江贤章黄建忠 (福建师范大学生命科学学院，福州，350007) 摘要：DHA(Docosahexacnoicacid，二十二碳六烯酸)是重要的∞-3高度不饱和脂肪酸之一，具有各 eDNA文库，其原始文库库客为5．Oxi06 种重要生理功能。本文构建了Schizochytrium cfu； sp．FJU-512 从5’端测序，共获得4005条高质量EST(Expressedsequencetag，表达序列标签)，平均长度470bp， 酶、高度不饱和脂肪酸合成酶、G蛋白B亚基，m谷胱苷肽S．转移酶、甘油醛-3磷酸脱氢酶；与真 n磁管蛋白l、肌动蛋白A’¨及甘油醛．3磷酸脱氢酶的基因；根据基因命名词汇体系，对具有注释 信息的基因进行了功能分类，结果表明结合与催化活性占细胞分子功能的比重较大(分别为36．00％ eDNA文库的构建与分析，为研 unigenes(31，07％)与蛋白家族388个结构域相匹配．Schizochytrium 究Schizochytrlum脂肪酸生物合成PKS途径莫定基础。 关键词：高度不饱和脂肪酸；二十二碳六烯酸；裂殖壶菌：cDNA文库 DHA(Docosahexaenoicacid，二十二碳六烯酸)是重要的p3高度不饱和脂肪酸之一，具有抗心 其脂肪酸组成简单，是研究DHA生物合成的优庭模式材料。传统的观点认为．DHA是在线粒体或内 Mortella acid synthesis，FAS) 的多聚乙酰台成酶(Polyketide 中可能存在PKS途径It21。本文构建了Schizochytriumsp．FJU．512 cDNA文库中高丰度、高保守基因，并进行了EST sequencetag，表达序列标签)，分析Schizochytrium 功能分类与预测．为研究Schizoch仲·ium脂肪酸生物合成PKS途释奠定基础。 辽宁·土t 奎国喀耳t■技术与毒耳焉●学术套诅话-文毒 2006．$．2-6 材料与方法 菌种 裂殖壶菌Schizoehytriumsp，FJU-512．系本研究小组从海水中分离纯化并保存。 培养基(霉L．1)：葡萄糖30，蛋白胨10，酵母抽提液5．海水晶15。 主要试剂 Total 11RNaseH．Reverse SuperScriptTM Transcfiptase(1nvitrogen)