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菠菜色素的提取和分离 10精化(1)班 201024102125 秦洁珊 摘要：在实验中采取了浸泡法提取色素操作简便 易行，损失少，产率高，使用薄层色谱、柱色谱对叶绿素、胡萝卜素和叶黄素进行了分离。薄层层析时使用了石油醚-乙酸乙酯=展开剂。在柱层析时，用不同洗脱剂分离得到不同物质。关键词：菠菜色素 提取 分离 一、实验目的: (1)通过菠菜色素的提取和色素分离，了解从天然物中分离活性有机化合物的过程和基本操作。 (2)学习柱色谱和薄层色谱分离操作，掌握菠菜色素的提取和分离操作技术及化合物Rf值的测定方法，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。 叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被甲酰基所取代从而形成了叶绿素b。叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。 胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体，即(-胡萝卜素、β-胡萝卜素和γ-胡萝卜素，其中β-胡萝卜素含量最多，也最重要。叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。薄层色谱是在被洗涤干净的玻板（10×3cm左右）上均匀的涂一层吸附剂或支持剂，待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上，凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂，或在紫外灯下显色。若滤纸、溶剂温度等保持恒定，则各种物质呈现特定的Rf值，成为鉴定物质的极重要的常数。柱色谱 乙醇：沸点78.4℃ 石油醚：沸点40~80 ℃。 四、实验仪器与试剂 仪器：天秤 布氏漏斗 研钵 分液漏斗 显微载玻片 毛细管 层析柱( 20×10 cm ) 液漏斗 试剂: 石油醚、 乙醇( 95% ) 、 菠菜叶、乙酸乙酯 ( 化学纯) 、 无水硫酸钠、 硅胶 2、 3层析洗脱 五、结果与讨论 Rf值计算 色素种类 胡萝卜素 叶绿素 叶黄素 Rf值 7.6/7.8=0.97 0.4/7.8=0.05 3.05/7.8=0.39 结论：菠菜中各色素的Rf值得大小：胡萝卜素叶黄素叶绿素。 讨论:本次实验的萃取效果不尽人意，颜色不深。可能是因为研磨前用石油醚浸泡的时间不够长，并且抽滤时间太长而使乙醚挥发了的缘故，导致色素不能很好地提取出来。薄层层析我们是用了色素提取得好的小组的样品来点样,效果很好,斑点很清晰;柱层析是用我们自己萃取出来的色素做的，用石油醚洗脱出来只有两个色素带，最后也只是洗脱出来胡萝卜素和叶绿素，颜色不深。 六、注意事项 1、选材时要注意选取新鲜、颜色深的叶片； 2、研磨时丙酮要少量分次加入，以免研磨时液体飞溅； 3、萃取色素是应轻摇，避免乳化 3、抽滤时间不宜太长避免石油醚挥发； 4、层析柱填装时应紧密且均匀（用洗耳球轻敲），以免影响渗透速度及显色的均匀。 七、参考文献 [1]兰州大学化学系有机化学教研室 复旦大学化学系有机化学教研室 色谱法 《有机化学实验 第二版》北京：高等教育出版社 1994 104~112 [2]李好样，冯轶雪. 菠菜色素的提取与分离[A]. 太原师范学院学报（自然科学版） 2004,(9):64. [3] 王福来．有机化学实验[M]．武汉：武汉大学出版社，2001[4] 于惠芬 陈彦玲.菠菜色素的提取及性能测试[J].长春师范院 学报,2003,(2):18-20 - 1 - 20g菠菜+10ml石油醚：乙醇（3:2）浸泡20分钟→研磨→抽滤(收集滤液)→滤渣+10ml石油醚：乙醇（3:2）浸泡10分钟→研磨→抽滤→收集滤液并与20mL水混合→分液→取有机层(无水硫酸钠 现象: 滤液呈深绿色，分液后有机层在上面 点样 展开 将点样后薄层板放入盛20mL石油醚:乙酸乙酯(3:2)烧杯中,并罩上表面皿 求Rf值 现象:薄板上出现三个斑点:从上到下—橙黄(胡萝卜素) →黄(叶黄素) →绿(叶绿素) 装柱 湿法：9g硅胶溶入40g石油醚,石油醚保持一定高度 装样 样品均匀滴在滤纸圈上 洗脱 1.先用石油醚再用石油醚:乙酸乙酯(3:1)洗脱胡萝卜素 2.用石油醚:乙酸乙酯(3:2)洗脱叶绿素 现象:用石油醚洗脱时出现四种不同 颜色(实际操作中只看到两种),先 是橙黄色的胡萝卜素被洗脱出来, 然后是叶绿素