针灸对CTX化疗小鼠骨髓组织中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响.pdfVIP

[摘 要] 目的：探讨针灸对CTX化疗小鼠骨髓造血微环境的影响，揭示针灸升 白的机理。方法：将体重为22±2g （KM ）小鼠KM ，称量后依据体重随机分为正 常组、模型组、针刺组和艾灸组4组。正常组小鼠腹腔注射生理盐水，剩余3组小 鼠腹腔注射CTX溶液造成骨髓抑制。针刺组、艾灸组分别给予针刺和艾灸治疗， 正常组和模型组则陪同固定。检测治疗前后外周血白细胞数量；在治疗3天、5 天后，分别观察骨髓组织中基质金属蛋白酶MMP-2 、MMP-9 的表达。数据分析 采用SPSS13.0 for Windows统计分析软件。结果：1.腹腔注射CTX后小鼠外周血 白细胞数量降低，而针刺和艾灸能够使降低的白细胞数量升高；2.腹腔注射CTX 后小鼠骨髓组织中基质金属蛋白酶MMP-2 、MMP-9蛋白的表达降低，针刺和艾 灸可以明显上调骨髓组织中MMP-2 、MMP-9蛋白的表达。结论：针灸通过促进 骨髓细胞中基质金属蛋白酶表达增强、骨髓造血微环境中基质金属蛋白酶活性升 高，进而导致ECM 中或基质细胞膜上细胞因子的释放、骨髓微血管损伤的修复。 [关键词] 化疗；骨髓抑制；造血微环境；基质金属蛋白酶；针灸 化疗是当前治疗恶性肿瘤的重要手段之一，但大多数抗癌化学药的选择性 差、毒性大，治疗剂量与中毒剂量相近，在杀伤大量肿瘤细胞、控制肿瘤细胞扩 散、增殖的同时，也使机体增殖活跃、生长旺盛的骨髓组织受到损伤，影响机体 的造血功能和正常细胞代谢。其所致的骨髓抑制是限制化疗广泛应用和疗效发挥 的重要因素，必须采取有效的措施进行处理，才能确保化疗安全进行。针灸疗法 在拮抗化疗药物的毒副作用、保护机体造血功能方面更是得到医学界的公认。大 量的临床及实验研究结果证实针灸不仅能够减轻化疗后骨髓抑制，提升外周血白 细胞数量，而且能够改善骨髓造血功能，提高机体免疫力。 课题组在该领域已潜心研究20多年，前期的临床研究结果表明针灸具有抗放 化疗不良反应的作用，可提升白细胞数量[1]，在骨髓造血微环境方面的调控研究 也做了一些初步的探讨，而针灸对CTX化疗小鼠骨髓微环境中基质金属蛋白酶表 达的影响方面目前尚无人问津。本研究从CTX损伤小鼠造血微环境为切入点，通 过观察针灸对造血微环境的修复作用以及对骨髓组织中基质金属蛋白酶 MMP-2 、MMP-9蛋白表达的调节，揭示针灸改善化疗后骨髓抑制，提升外周血 白细胞的机理。 677 1 材料与方法 1.1 实验动物 由河南省实验动物中心提供健康清洁级雄性昆明种(KM) 小鼠 [ 批 号:scxk(豫)2005-0001] ，7周龄，体重22±2g 。根据小鼠体重删除两极小鼠，保留 64只。 1.2 主要试剂与仪器 主要试剂：环磷酰胺、兔抗小鼠 MMP-2 多克隆、小鼠 MMP-9 多克隆抗体、 免疫组化染色试剂盒、根过氧化物酶、性树胶封片剂二甲苯、小牛血清、苏木精 -伊红。主要仪器：奥林巴斯双目光学显微镜、薄片离心机、电热干燥箱、-80℃ 低温冰箱等。 1.3 小鼠骨髓抑制模型复制 造模方法如下：B 、C、D 组小鼠参照《新药(西药)临床前研究指导原则汇编》 [3] 的造模方法（略），第 3 天停药后 4h 模型即成（依据环磷酸胺药代动力学过程， [4] 4h 后药物活性消失 ），A 组小鼠按照 0.02ml/g 用药量，腹腔注入同体积生理盐 水。 1.4 治疗方法 （1）穴位选取 [5] 小鼠穴位定位参考小鼠常用针灸穴位 ：“大椎”位于背中线上，第7颈椎与 第1胸椎棘突间；“膈俞”位于背部第7胸椎棘突下，左右各1mm处各1穴；“ 肾俞” 位于小鼠背部第2腰椎棘突下，左右各1mm处各1穴；“足三里(后三里)”位于小鼠 后肢膝关节下外侧，腓骨小头下3.5mm处取穴，左右各1。 2 ）治疗方法 （ ①正常组与模型组：在造模完成后，每日陪同针刺组、艾灸组抓取、固定， 不做任何治疗。②针刺组：按照造模时间的先后顺序，在造模完成后4h开始针刺 治疗。各组小鼠配对同时进行，选取每组一只小鼠俯卧位固定于鼠板上。采用管 式进针法，用华佗牌美容毫针（规格：0.19×10mm，针柄20mm ），进针深度为3mm 。 穴位均采用直刺，行平补平泻手法，留针6min，每日1次，连续治疗3天和5天。 ③艾灸组：在造