雷帕霉素等免疫抑制剂影响肝癌生长及复发转移实验和临床研究.pdf

博士论文 中文摘要 雷帕霉素等免疫抑制剂影响肝癌生长及转移复发的实验和临床研究 中文摘要 原发性肝癌是亚洲及非洲大陆最常见的恶性肿瘤之一，手术切除是其首选治 疗方法。但由于肝癌多合并伴有不同程度的肝硬化，使手术切除受到极大的限制， 在很多情况下肝移植成为治愈肝癌的唯一选择。从某种程度来说，肝移植也可能 是治疗肝癌的最佳手段之一，因为肝移植能最大限度的切除肿瘤及移除硬化的肝 脏，从根本上消除肝癌产生的土壤，预防肿瘤的复发；同时可避免出现肝切除术 后肝功能衰竭等致死性并发症。 由于供肝的短缺，肝癌肝移植术后肿瘤的转移复发引起了人们格外的关注， 对其疗效的评价也更为谨慎。既往认为，肝癌肝移植术后免疫抑制剂的应用可能 促进了术后肿瘤的转移复发；但事实上，并不是每一种免疫抑制剂都会促进肿瘤 的生长。不同免疫抑制方案对肝癌肝移植术后肿瘤的转移复发可能有不同的影 响，但目前此方面的系统研究还较少。在此，我们将探讨三种主要的免疫抑制剂 (他克莫司，雷帕霉素和环孢素)对肝癌生长及转移复发的影响及相关机制，为 肝癌肝移植术后免疫抑制方案的选用提供可借鉴的依据。 第一部分： 雷帕霉素等免疫抑制剂对肝癌生长及转移的实验研究 体内试验中，利用复旦大学肝癌研究所(以下简称我所)建立的高转移人肝 癌裸鼠模型LCI．D20，探讨目前临床上常用的三种免疫剂(他克莫司，雷帕霉素 和环孢素)对裸鼠移植瘤生长及自发肺转移的影响。用免疫组化及TUNEL法分 别检测移植瘤组织中细胞增殖核抗原(PCNA)、微血管密度(MVD)及细胞调 亡水平的改变。结果表明，与对照组相比，雷帕霉素抑制了LCI—D20模型移植 4-0．31cm3VS． 瘤的生长(瘤重0．76+0．389VS．2．09土0．759，P=0．001；肿瘤体积O．65 2．1l土1．02 cm3，P=0．003)及肺转移的发生(3／7VS．7／7，P=0．007)；环孢素组肺 部转移灶的数目较对照组明显增多(6土2VS．4士1，P=0．046)；他克莫司组肺转移 发生率虽较对照组减少，但无显著性差异(5／7VS．7／7，P=0．078)；环孢素及他克 莫司均对移植瘤的生长无影响(P0．05)。进一步的研究表明，与对照组相比， 4- 雷帕霉素抑制了移植瘤组织中PCNA的表达(免疫组化阳性指数244932．2 VS．37 P=0．000)；而他克莫司及环孢素对上述三方面均无显著影响。 体外实验中，采用扫描电镜、肌动蛋白聚合实验、MTT、流式细胞仪、Boyden 博士论文 中文摘要 小室、明胶酶谱法分别研究各免疫抑制剂对人肝癌高转移细胞株MHCC97H增 PCR、westemblot 殖、凋亡、细胞周期、运动、黏附及侵袭的影响。用real—time 等方法探讨免疫抑制剂对与肿瘤进展相关的分子，如E—cadherin，、ICAM—l，、 MMP一2等表达的影响。结果表明，与对照组相比，环孢素促进了MHCC97H细 胞侵袭性表型的改变，运动、侵袭能力的增强及F型肌动蛋白的聚合。另外，环 孢素还促进了细胞及肿瘤组织中MMP一2的表达。雷帕霉素则抑制了MHCC97H 细胞的增殖，并使细胞周期停滞于GO．G1期，但并未促进细胞调亡。雷帕霉素 及他克莫司均抑制了MHCC97H细胞的运动、侵袭和黏附，同时两者还抑制了 ICAM一1和MMP一2在细胞及肿瘤组织中的表达。 从上述结果中我们可以得到初步的结论：环孢素促进了肝癌细胞的转移；他 克莫司至少不促进肝癌细胞的转移；而雷帕霉素则抑制了肝癌细胞的增殖及转 移。 第二部分：雷帕霉素抗肝癌血管形成机制的初步研究 前述的研究发现，雷帕霉素抑制肿瘤血管形成是其抑制移植瘤生长与肺转移 的重要机制之一。然而，雷帕霉素抗肝癌血管形成的具体分子机制仍未得到阐明。 在此，我们先用基因芯片