实验一 昆虫表皮化学成分测定.pptVIP

实验一 昆虫表皮化学成分的测定 一 实验原理 表皮的主要化学成分是几丁质和蛋白质，此外还包括酚类、脂类、色素和无机盐等。 （一）几丁质 几丁质是昆虫表皮的重要成分之一，占虫体干重的25—40%。 几丁质是纤维素的一种衍生物，分子量为5，000——150，000道尔顿，残基数50——100不等，化学性质非常稳定。 几丁质的化学性质 几丁质具有高度的稳定性和不溶性，使得昆虫表皮成为有效的保护层； 表皮上的几丁质主要为α-几丁质，它在水中不明显膨胀，主要存在于不再生长的外骨骼，给表皮带来了物理上的稳定性。 几丁质与蛋白质的交联方式，形成了外骨骼稳定而不可改变的结构。 几丁质不溶于水、稀碱、稀酸、酒精、乙醚等溶剂，但以浓碱在高温下（约160℃）处理昆虫表皮，几丁质分子虽不能溶解，但可进行部分水解，脱去乙酰基而形成葡糖胺和乙酸。在酸性条件下，几丁糖遇碘呈紫红色，由此测得几丁质的存在。 （二）蛋白质 蛋白质是决定昆虫表皮物理性质的重要组分。上表皮和原表皮中含大量的蛋白质，在外表皮中形成鞣化蛋白。 蛋白质占表皮干重的50%以上，其含量因昆虫的种、发育阶段、不同区域有差异。 结合形式：与几丁质或脂类蛋白结合成糖蛋白或者脂蛋白，外表皮中的大部分蛋白质是性质稳定、结构坚硬的鞣化蛋白。 蛋白质的检验 双缩脲反应 在碱性溶液中，肽键与Cu2+作用，形成紫色络合物，该反应即双缩脲反应。 双缩脲反应是肽和蛋白质所特有的，而为氨基酸所没有的一种颜色反应。含有即肽键的化合物与碱性 铜溶液作用，就会形成紫色或蓝紫色络合物。 黄蛋白反应 原理 硝酸对苯环发生硝化作用，生成黄色的芳香硝基化合物，使蛋白质发生变性。 2 供试材料 家蚕、粘虫幼虫 3 方法及步骤 （1）几丁质的定性测定 将家蚕幼虫体壁剪成小块，放入盛有3ml饱和KOH溶液的试管中，用软木塞塞紧，并在软木塞上插上注射针头，以防止加热时试管内压剧增而引起爆炸； 加热至140～160℃，保持15分钟； 倒梯度酒精冲洗，滤纸吸干，备用； 在白磁化验板上，加1～2滴0.03%I2-KI液，再加1～2滴1%H2SO4，如果产生紫褐色反应，即为几丁糖。 用未经KOH煮过的表皮，重复上述步骤，结果有何区别。 蛋白质定性测定 体壁蛋白液制备 取昆虫体壁，剪碎放入研钵中，干研或加水研磨，大约1g体壁加水100ml，研后用尼龙纱过滤，取其滤液。 双缩脲反应 取1～2ml配制的体壁蛋白质溶液，加同体积10%NaOH溶液，摇匀后，再加几滴1%CuSO4溶液，边加入边观察颜色有何变化。 黄蛋白反应 取家蚕表皮1小块，去除肌肉组织，用水洗干净，放在白磁板上，吸去多余水分，以玻璃棒沾一滴（或加一滴）浓HNO3,观察表皮颜色有何变化？ 再加一滴40%NaOH，颜色又有何变化？表示昆虫体壁蛋白质分子中含有什么基本结构？可哪有哪些氨基酸？试解释之。 * N-乙酰-D-葡萄糖胺通过β-1，4-糖苷键聚合而成；15-30个几丁质分子构成几丁质纤维，外包蛋白质，形成几丁质纤丝。 N-乙酰氨基葡萄糖-氨基葡糖多聚体 * * *