云南省主要推广核桃品种分子标记鉴别及遗传分析.pdf

核桃产业的发展，对于核桃遗传背景方面知识的需求和应用科学手段鉴别核桃品种， DNAs。即随机扩增多态性DNA)分子标记和issR(Inter-simpleSequenceRepeats简单序 列重复间区)分子标记技术对云南省11个漾湃核桃品种进行分子鉴别和遗传分析。为 品种鉴别提供分予水平上的参考，为核桃的育种提供理论依据。参试的11个核桃品 种包括4个云南乡土核桃品种：漾濞泡核桃、大姚三台核桃、夹绵核桃和铁核桃和7 个优良杂交品种：云新高原核桃(云新7914号)、云新云林核桃(包括：云新7926号、 的内容及结果如下： 1．DNA提取：以漾濞泡核桃不同生长时期的叶片为材料，采取了高盐低PH法和 3种方法对所提取的DNA样品进行检测。比较所得DNA的产量、质量，认为不同发育 时期叶片得DNA提取效果不同，其中以冬芽和新叶效果较好，老叶最差；两种提取方 法得到得的DNA产量和质量有所不同，高盐低PH法提取的DNA纯度高，但是产量较 低，而CTAB法则相反，产量高，纯度低。 2．建立稳定的反应体系以漾濞核桃中的大姚三台核桃为实验材料，通过对影响 扩增程序的试验研究，确定了漾濞核桃的最适RAPD反应体系和扩增程序。即在25uL 反应体系中包括0．75u．L-TaqDNA聚合酶，3．0 mg．L_l模板，2．5ul s，94℃变性40s，36℃退火608，72℃链延伸120s，45次循环后，72℃延伸600 S。 1．OuL(50ng)， ISSR反应体系和扩增程序为总的20uL反应体系中包含：模板DNA dNTPs1．6uL，25mM Mg”1．8uL， 10XBuffer2．0uL，lOpm01．uL-1引物1．5uL，2．5mM 5U U．98uL；热循环体系为：95℃预变性600s，然后 TaqDNA聚合酶0．12uL，ddH。0 94。C变性30S，50℃退火60S，72C链延伸120s，共35个循环最后72C延伸420 Sa 3．引物筛选通过对RAPD和ISSR引物的筛选，分别筛选出8个能够扩增出清晰、 A07、SBSA08、 稳定并能扩增出多态性位点的RAPD引物和ISSR引物。RAPD引物为：SBS SBSB06、SBSEll、SBSFIO、SBSS03、SBSS06和SBSSIO；ISSR引物及其退火温 (退火温度52．8℃)和ISSR23(退火温度48．6℃)。 4．指纹图谱建立，品种分子鉴别：RAPD引物SBSS06号引物所扩增的位点能够 完全鉴别出l 鉴别出参试的¨个漾濞核桃品种，由此建立了各品种的指纹图谱。 5．遗传多样性：RAPD检测得到多态位点(PPB)值为61．63％，平均每条引物获 位点，说明11个核桃品种间有一定的遗传差异。POPGENE32软件分析获得的遗传多 10， 样性参数分别为，RAPD检测的等位基因数(Ne)为1．3552，基因的多样性(H)为0．21 以上数据表明这11个品种问的遗传多样性水平不高。 6．品种间近缘关系：用RAPD和ISSR检测所得的Nei’s遗传距离对参试的11个品种 进行聚类分析分别绘制聚类图。RAPD检测的结果可以将11个品种分为三组：乡土优 差的乡土品种(夹绵核桃和铁核桃)。ISSR检测的结果将11个品种分为4组：两个云南 优良乡土品种、两个品质较差的乡土品种、亲本组合为漾濞泡核桃x云林A7号的4种 和306)。 多态性位点的能力上强于RAPD标记技术。用Mantel检测对两种标记技术进行相关性分 可重复性和单引物获得遗传多态位点的能力，认为ISSR标记技术更适合用于漾濞核桃 的品种鉴别和遗传分析。 关键词：漾濞核桃，分子标记，RAPD，ISSR，品种鉴别，遗传分析 Dodeisoneofthemost economic in