黑龙江省稻瘟病菌无毒基因的检测.pdfVIP

黑龙江农业科学 2014(12)：7O～73 HeilongjiangAgriculturalSciences 猹．蝴保 黑龙江省稻瘟病菌无毒基 因的检测 张崎峰 ，靳学慧 ，蔡鑫鑫 ，李金 良 ，陈海军 (1．黑龙江省农业科学院 黑河分院，黑龙江 黑河 164300；2．黑龙江八一农垦大学，黑龙江 大 庆 163319) 摘要 ：为 了探索黑龙江省稻瘟病菌无毒基 因的分布情况 ，通过分子标记法对黑龙江省 】9个地 区的 204个稻瘟 病茵的菌株进行 PCR扩增，检测是否含有无毒基 因A pita、AVR-CO39、P 2和 Pw，3。结果表 明：各基 因的出现频 率差异较 大，PwJ2的 出现频 率较 大，为 52．94 ，PWL3最低 ，出现频 率 为 0，A ，一pita和AVR— C039的出现频率分别为39．22 和 37．75 。黑龙江省稻瘟病菌的群体结构复杂 ，在不 同地 区甚至相 同地 区 的菌株 中无毒基 因的存在情况都有明显的差异 。 关键词 ：黑龙江省 ；稻瘟病菌；无毒基 因；分子标记 中图分类号 ：$435．111．4 l 文献标识码 ：A 文章编号 ：1002—2767(2014)12-0070—04 水稻稻瘟病是水稻产 区危害最严重的病害之 对 6O个品种 (系)采集了近千份水稻穗颈瘟标样， 一 ， 流行 年 份 一般 减 产 1O ～2O96／，严 重 的达 采用眉毛挑单孢法 6【分得 204个菌株 。 40 ～ 5O [ 。 目前比较有效的预防措施是种植 1．1．2 引物设计 将分离菌株在 PDA培养基 抗病的水稻品种 ，但稻瘟病菌变异快 ，常导致生产 上活化后，接种在 马丁 氏液体培养基 中，28C、 中抗病品种推广 3～5a后 即丧失抗性 。成为感病 120r·min。振荡培养 10～ 12d，滤 出菌丝。根据 品种。因此 ，只有加深对水稻与稻瘟病菌互作机 SDS～CTAB法提取 DNAE 。 制的了解 ，才能有效长久地预防稻瘟病 。稻瘟病 根据 GenBank 中登 录 的 A pita，AVR- 菌与水稻寄主之间的互作符合 Flor的 “基 因对基 C039，PWL2和 P L3四个无毒基 因序列 ，采用 因”学说 ，了解无毒基 因的分布情况，有助于选择 Primer3引物设计程序，设计 出各无毒基 因的特 具有相应抗病基 因的水稻 品种进行合理布局 【 。 异性引物 ，并 由上海生工生物工程技术有 限公司 l 材料与方法 合成，引物序列见表 1。 TaqDNA 聚合 酶、dNTP和 Marker均购 自 1．1 材料 大连宝生物工程有 限公司。 1．1．1 供试菌株 2006年在黑龙江省 19市 (县) 表 1 引物序列 Table 1 Theprim ersequence 1．1．3 供试对照菌株 供试 的阳性对照和阴性 收稿 日期 ：2Ol4-07—16 对照菌株见表 2。 基金项 目：黑龙江省科 技攻关 资助项 目(GB06B105—2)；黑龙 1．2 方法 江省农垦总局科技攻关资助项 目(HNKXIV一0卜04—02) 第一作者简介：张崎峰 (1983一)，男 ，黑龙江省鹤 岗市人 。硕 PCR体系反应体系 (20 “I)：TaqDNA聚合 士 ，助理研究员 ，从事植物病理学研究和玉米抗病 育种工作 。 酶 1．0 U，Mg纠 2．0 mmoI ·I ，DNA E—mail：hhzqf83@ 163