丙二醛（MDA）的测定.ppt

目的： 1.掌握用试剂盒测定丙二醛的原理和方法； 2.了解丙二醛测定的临床意义。 原理： 机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸 （polyunsaturatedfattyacid,PUFA）,引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化 物，如：醛基（丙二醛MDA）、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基，以及新氧 自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解 产物，而且通过链式或链式支连反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能 导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞 代谢及功能障碍，甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸（PUFA）的 过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化的分解产物引起细胞损伤。因而测试 MDA的量常常可以反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。 过氧化脂质降解产物中的丙二醛（MDA）可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成 红色产物，在532nm处有最大吸收峰。 取4支干净试管，按下表进行操作。 管号 标准管 标准空白管 测定管 测定空白管① 试剂 10nmol/ml标准品/ml 0.1 无水乙醇/ml 0.1 血清（桨）②/ml 0.1 0.1 试剂A/ml 0.1 0.1 0.1 0.1 ? 混匀 （摇动试管） 试剂B/ml 3.0 3.0 3.0 3.0 试剂C/ml 1.0 1.0 1.0 ??50%冰醋酸/ml??? 1.0 加入试剂后，用旋涡混匀器混匀，试管口用保鲜膜扎紧，刺一小孔，95℃水浴40min③,取出后流水冷却，然后3500-4000r/min，离心10min。取上清， 532nm处，1cm光径，用蒸馏水调零，比色测定各管吸光度值。 * 实验十 丙二醛（MDA）的测定 材料：人血清（或其它组织匀浆）。 仪器：722型分光光度计、恒温水浴锅、离心机和离心管、旋涡混合 器、试管、移液管。 试剂：丙二醛测定试剂盒（含试剂A、B、C和标准品）。 50%冰醋酸 无水乙醇 实验十 丙二醛（MDA）的测定 操作： 按指导做。 计算： 按指导做。 报告： 按常规。 实验十 丙二醛（MDA）的测定 操作： 实验十 丙二醛（MDA）的测定