表皮层基底细胞微核检测方法.pdfVIP

第 11 卷 　第 2 期 华 　夏 　医 　学 　　　Vol . 11 No . 2 　1998 年 4 月 AC TA 　M ED ICINA E 　SIN ICA 　　　Ap r . 1998 表皮层基底细胞微核检测方法 何水淋1 ① 　罗伯特 ·贝克2 (广西桂林医学院1 　桂林市 　54 100 1 　Chem Affair s Pt y L t d2) 摘要 　采用活体给药 、非连续梯度离心分离和体外培养引入细胞动力阻断剂的技术 ,建立了裸鼠皮肤表皮基底细胞微 核检测方法 。实验用 6 周龄雄性裸鼠,在一次性皮肤涂抹受试化合物 48h 后 ,剥离全层皮肤 。经 1 %胰蛋白酶溶液处 理 ,分离出表皮层 ,剪碎 ,置 DNAse 溶液中室温下搅拌 ,过滤 ,离心收集细胞 。细胞悬液移于 Percoll 溶液 ,离心留下含基 ( μ ) 底细胞的底层溶液 。细胞置 37 ℃二氧化碳培养箱培养 ,48h 后更换新鲜培养基 含细胞松弛素 B 3 g/ ml ,在同样条件 下 ,继续培养 48h 后 ,按常规方法收获细胞 。使用氨基甲酸乙酯作为阳性试验物 ,双核细胞微核率达 97 . 3 ‰,丙酮阴性 对照物仅为 9 ‰。实验在选定的浓度范围内可获得线性剂量反应曲线 ;镜下可见单个分离的细胞 ,细胞边界清楚 ,胞浆 染色均匀 ,细胞核与微核的染色结构清晰 ,微核易于判断 。 关键词 　基底细胞 ;表皮层 ;微核检测 ; 鼠 中图分类号 　Q 243 ;Q 2 —33 The Detection Method f or Micronucleus of Cuticular Layer Basal Cell/ He Shuil in ,/ / Guil in Medical Col lege( 54 100 1) ;Dr. Robert Baker/ / Chem Affairs Pty Ltd , P. O. Box 980 Lane Cove , NSw2066Austral ia Abstract 　The detection met hod for micronucleus of cuticular layer basal cell of nude mouse was est ab lished by viviadminist ration of drugs and nonconsecutive gradient cent rifugating sep aration ,and t he tech nique of cytodynamic blocking agent led in by cult ure in vit ro . The experiment al animals were nude mice aged 6 weeks ,after 48 hour s of giving t hem a single application of tested chemical compound , t heir full layer s of skin were st ripped and dealt wit h 1 % t ryp sin solution . The cuticular layer were sep arated and sheared to pieces and p ut t hem into DNA se solution under room temperat ure and stirred , filtered , an