人脂联素在大肠杆菌中地可溶性表达.pdfVIP

2010年 1月 四川大学学报(自然科学版) Jan．2010 第47卷 第 1期 JournalofSichuanUniversity(NaturalScienceEdition) Vo1．47 No．1 doi：103969／j．issn．0490—6756．2010．01．032 人脂联素在大肠杆菌中的可溶性表达 周 培 ，封淑颖 ，邹竹荣 ，李雪娇 ，詹晓莹 ，曹丽娟 (1．华东师范大学生命科学学院，上海 200062； 2．云南师范大学生命科学学院，昆明 650092) 摘 要 ：为了提高重组人脂联素在大肠杆菌中的可溶性，构建和表达 了增溶标签与人脂联素 的融合表达载体．这些标签包括大肠杆菌硫氧还蛋 白和 NUSA蛋 白、酿酒酵母 SUMO蛋 白和 噬热海洋茵Thermotogamaritime的红素氧还蛋 白．结果显示，所有的人脂联素融合蛋 白在大 肠杆菌中都获得 了高水平的表达 ，但可溶性存在很大差异，说明不同融合标签对人脂联素可溶 性表达的促进作用不同．其 中，红素氧还蛋 白与 SUMO蛋 白组合一起对人脂联素可溶性的增 强作用最为显著 ，其相应的融合蛋 白几乎全部可溶．另外，通过酵母 SUMO／Uipl反应 ，经 His标签亲和层析纯化得到的人脂联素融合蛋白能被有效酶切 ，加工为人脂联素成熟肽产物． 关键词：人脂联素；大肠杆菌；增溶标签 ；可溶性表达 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：0490—6756(2010)01—0161—06 SolubleexpressionofhumanadiponectininEscherichiacoli ZHOUPei，FENGShu—Ying ，ZOUZhu—Rong。，LIXue—Jiao ， ZHAN Xiao—Ying ，CAOLi—Juan (1．SchoolofLifeSciences，EastChinaNormalUniversity，Shanghai200062，China； 2．SchoolofLifeSciences，YunnanNormalUniversity，Kunming650092，China) Abstract：InordertoimprovethesolubilityofrecombinanthumanadiponectininEscherichiacoli，con- structsforexpressinghumanadiponectinproteinfusionswithafew ofsolubility-enhancingtagswere generated．ThesetagsincludetwoE．coliproteins，ThioredoxinandNusA，SUMO proteinofyeast SaccharomycescerevisiaeandRubredoxinfrom thermophilicoceanicbacterium ，Thermotogamaritime． Theresultsdemonstratethatallhumanadiponectinfusionproteinswerehighlyexpressed，butwithre— markablydifferentsolubility，implyingthatthesefusion tagsdifferentiallyimprovethesolubleexpres— sionofhuman adiponectin．Therein，thecombinationaltag ofRubredoxinand SUM0 exhibitedthe highestsolubility—enhancement，and itscorrelatedfusionproteinwasalmostcompletely soluble．Fur— thermore，byusingyeastSUMO／Ulplr