染色体步移技术克隆已知序列侧翼启动子地研究进展康丹.pdfVIP

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2013, 21(3): 355~366 DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2013.03.013 评述与展望 ReviewandProgress 染色体步移技术克隆已知序列侧翼启动子的研究进展 1 1 1 1 2* 1，3* 康丹 方小艳 游腾飞 王婷婷 眭安平 杨星勇 1西南大学生命科学学院，重庆400715；2西南大学图书馆，重庆400715；3重庆师范大学生命科学学院，重庆401331 *通讯作者，tobpol3@；yangxy94@ 摘 要 启动子是基因表达调控的关键顺式作用元件，也是基因工程表达载体的一个重要元件。对启动 子结构和功能的阐释，有助于基因表达的时空控制。选择恰当方法克隆序列未知的启动子有着非常重要 的意义和广阔的应用前景。随着PCR技术的问世，基于PCR扩增的染色体步移技术进行启动子克隆具 有较好的可操作性，其在基因的分子生物学和基因工程研究方面也是一项重要的技术策略。本文讨论了 近年来以PCR为基础的染色体步移技术克隆启动子的方法，主要包括反向PCR、接头介导PCR、半随机 引物PCR三大类，归纳比较了其克隆原理和研究进展，为克隆已知序列旁侧未知启动子序列提供参考。 关键词 染色体步移，启动子，反向PCR，接头介导PCR，半随机引物PCR Progress of Chromo FlankedbyaKnownSegment 1 1 1 1 2* 1,3* KANGDanFANGXiao-YanYOUTeng-FeiWANGTing-TingSUIAn-PingYANGXing-Yong 1TheSchoolofLifeScience,SouthwestUniversity,Chongqing400715 *Correspondingauthor,tobpol3@;yangxy94@ Abstract Promoterisakeycis-actingelemen elementoftheexpressionvectoringeneticengineerin contributestoconstructingvectorandcontrollin inducesproteinexpressionselecti significanceandwideapplicatio several PCR-based chromosome walking method sequence rapidacquisitionofunknownpromoter,includin PCR.Theseprinciple Keywords Chromosomewalking,Promote 启动子是位于结构基因5端上游的一段DNA 表达(Connorsetal.,2002)。因此，启动子的克隆与 序列，能够指导RNA聚合酶与模板正确结合，启动 分析有着非常重要的理论意义和广泛的应用前景。 基因转录。在基因表达调控过程中，启动子起着非 随着高通量全基因组测序时代的到来，许多模式生 常重要的作用，决定着特定基因定时、定位、定量地 物如人 (Collin 、小 基金项目：国家自然科学基金项目(No 收稿日期：2012-08-30接受日期：2012-09-24 农业生物技术学报 356 JournalofAgriculturalBiotechnology 鼠(Bultetal.,2008)、拟南芥(ArabidopsisGenome,快速，引物设计简单，成本低，但目标DNA片段的 2000)等物种的基因组序列已测定完成，可直接从 环化有时不甚可靠，PCR扩增的成功也依赖限制性 数据库中找到已知序列侧翼的启动子序列，设计 酶切位点和已知序列之间的距离，只适用于DNA 上、下游引物，用常规PCR技术克隆引物对之间的 小片段的扩增。 基因启动子序列(Saikiet