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高灵敏度测定壳聚糖酶活力的新方法及其比较研究.pdf
277
※生物工程 良品科学 2013,VoL34,No．09
高灵敏度测定壳聚糖酶活力的新方法及其比较研究
张永勤，张杰，常海燕，张坤，刘征东，罗彩华，牟晓凤
(青岛科技大学化工学院，山东青岛 266042)
摘要：目的：建立一种测定壳聚糖酶活力的新方法——3一甲基一2一苯并噻唑啉酮腙盐酸盐水合物(MBTH)法。方
法：以动力学法通过测定水解过程中壳聚糖释放还原端基的速率来计算酶活力，并以测定纤维素酶中壳聚糖酶的微
量活力为例，对测定过程中的几个关键参数进行讨论。结果：在37。C、pH6．0酶解条件下，底物壳聚糖溶液的测定质
量终浓度需达到2m加IlL以上；酶解反应时间控制在60min内为宜，可以用终点法定量测得壳聚糖酶活力。结论：通过
比较MBTH法、DNS法和铁氰化钾法发现MBTH法更准确、更灵敏、检测范围宽、操作简便。其检测限为13mU／mL，
法则较难准确测得。
关键词：壳聚糖酶；3．甲基．2一苯并噻唑酮；还原端；壳聚糖；3，5一二硝基水杨酸；铁氰化钾
ANovelSensitivefor andIts withTwoOthers
AssayChitosanolyticEnzymeActivityComparison
ZHANG Jie，CHANG Kun，LIU Cai—hua，MOU
Yong—qin，ZHANGHai—yan，ZHANGZheng—dong，LUO Xiao—feng
ofChemical ofScienceand
(College 266042，China)
Engineering，QingdaoUniversity Technology，Qingdao
novel for
Abstract：A methodthe of
spectrophotomelricquantitativeassaychitosanolyticenzymeactivityusing3-methyl·-2--
estalished．The Was
methodbasedon the endsreleasedthe
benzothiazolinone(MBTH)wasproposed measuring during
reducing
ofchitosanwiththe cellulase．Theeffectsofseveral on
enzymaticdegradation non—specificenzyme keyhydrolysisparameters
activitywerediscussedand resultsshowedthatthesubstrateconcentration
assay investigatedbymultiple-pointprocedures．The
was tobenolessthan2 withaninitialof the wasallowedto fornomorethan
required
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