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中国美利奴细毛羊BAC文库的三维PCR筛选
生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, October 25; 24(10): 1828-1831
Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061
cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved
技术与方法
中国美利奴细毛羊BAC 文库的三维PCR 筛选
吴新东, 陈芳, 李鑫, 邹毅辉, 邱巍, 高剑峰
石河子大学生命科学学院, 石河子 832000
摘 要: 本研究利用中国美利奴细毛羊全基因组 BAC 文库, 构建了可供快速筛选的两级水平的混合池, 一级混合池和
二级混合池(Primary pools and secondary pools) 。一级混合池基于每一384-well 盘而构建, 由盘、行、列三维混合池组成,
二级混合池基于整个BAC 文库而构建。设计了一种基于PCR 技术的快速筛选方法, 先筛选二级混合池, 再根据结果筛
选相应的一级混合池。利用此方法只需一步共66 个PCR 反应即可从BAC 文库中7.4 万个克隆中筛选出 1 个阳性克隆,
或三步100 个以内的PCR 反应筛选出多个阳性克隆。以绵羊基因组多态性分子标记BF94-1 为引物, 用一步共66 个PCR
反应成功筛选到 1 个阳性克隆373D13 。
关键词: 混合池, 三维筛选, BAC 文库, 绵羊
Three-dimensional PCR-based Screening of Chinese Fine
Wool Merino Sheep BAC Library
Xindong Wu, Fang Chen, Xin Li, Yihui Zou, Wei Qiu, and Jianfeng Gao
Life Science College of Shihezi University, Shihezi 832000, China
Abstract: For rapid screening, we constructed two levels pools (primary and secondary pools) of the bacterial artificial chromosome
(BAC) library of Chinese fine wool merino sheep. The primary pools were based on the individual 384-well microtiter plate and were
prepared with a three-dimensional pooling scheme. Three dimension (plate, row and column) pools were made for each. The
secondary pools were based on the entire BAC library. We developed a PCR based strategy to identify positive BACs from sheep
BAC library. First, we analyzed secondary pools DNAs, according to the result, we analyzed correlative primary pools. It was
one-step screening (66 PCR reactions) t
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