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甘蓝型油菜中黑芥子酶基因在大肠杆菌中重组质粒的构建和表达
农业生物技术学报 Journal ofAgriculturalBiotechnology 2008,16 (4): 642~646
·研究论文 ·
油菜黑芥子酶基因重组表达质粒 的构建 以及在大肠杆菌中 的表达 *
, **, , ,
肖海燕 王向阳 宋达峰 顾 青 沈莲清
, 310035
（浙江工商大学食品与生物工程学院 杭州 ）
： RTPCR 758 ( ) RNA (EC47 ,
摘要 通过 从浙双 油菜 种子 的总 中扩增 出黑芥子酶 ） 基 因 并克隆
（
测序 ， 测序结果在 GenBank 中的登陆号为 EF583560， 其翻译 的氨基酸序列与黑芥子酶 GenBank 中的登陆号为 Q00326） 仅有
一个氨基酸不同 ， 同源性达到 99%。克隆载体经 酶解后将 基因片段插入载体 pGEX4T1 中构建成原核表达载体
玉
pGEX4T1 ( )BL21(DE3) IPTG 在 90kD
， 并转入大肠杆菌 中。其重组菌株经 诱导表达， 处有表达量很高
的 1条带 。用 0.02mmol/LIPTG20 ℃诱导 2 h， 得到可溶 的 GSTMYR1 融合蛋 白， 用 10mg/mL芥子苷作底物 ， 经过检测其 比
活力为 0.0031U/mg。
： ； 克隆； 诱导表达
关键词 油菜； 黑芥子酶
中图分类号: S188 文献标识码: A 文章编号: 10061304(2008)04064205
Construction ofRecombinant Plasmid of Myrosinase
( ) Geneand ItsExpression in
XIAOHaiyan,WANGXiangyang**,SONGDafeng,GU Qing,SHENLianqing
Themyrosinase(EC47) genewasamplifiedbyRTPCR fromtotalRNA isolated from rape seed (
cv.Zheshuang 758), cloned and sequenced (GenBank accession number EF583560). Comparison of encoded proteins showed
that the protein of MYR1 shared highest amino acid sequence identity (99%) with that of myrosinase precursor (Q00326) from
(rape), and only one
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