低温和超低温保存对中国大鲵成熟精子的影响.pdfVIP

第35卷第2期 水生生物学报 V01．35．NO．2 2011年3月 ACTAHYDROBIOLOGICASINICA Mar．。201 1 DOI：10．3724／SP．J．1035．2011．00325 低温和超低温保存对中国大鲵成熟精子的影响 彭亮跃 肖亚梅 刘 筠 (湖南师范大学生命科学学院，蛋白质化学与鱼类发育生物学教育部重点实验室，长沙410081) 摘要：中国大鲵,4ndrias davidianus是中国特有的一种濒危有尾两栖类动物，为了保护这一珍稀物种并且为 中国大鲵人工辅助繁育建它一套可靠的技术，对中国大鲵的精子在O一4℃下低温短期保存和在液氮中超低 温长期保存进行_r研究。研究表明中国大鲵精子原液在常温下一般仅存活3～5h，4C下能存活6d，O*C下存 超低温冻存条件下，中国大鲵精子在液氮中保存两周后解冻，精子复苏率可达lO％一15％。利用扫描和透射 电镜观察冻融前后中国大鲵精子的超微结构，发现受冷冻损伤精子质膜}lj现膨胀、破裂；精子穿孔器和轴丝 显著弯曲，甚至断裂；波动膜明显脱落或膜结构损坏；精子线粒体嵴变形。结果表明，超低温冻存导致部分 中国大鲵精子超微结构发牛变化而产生冻伤，进而导致精子活力、复苏率下降。研究为建立规范化的中国大 鲵精液保存程序和中国大鲵规模化人工繁育提供重要参考。 关键词：中国大鲵；精子；低温保存；超低温冻存；超微结构 中图分类号：Q492文献标识码：A 文章编号：1000．3207(2011)02—0325—08 中国大鲵ChineseGiantSalamanderfAndrias 的存活状况、外观形态与超微结构进行观察，分析 davidianus)于l869年被Davidlll在巾国西部首次发超低温冷冻对中国大鲵精子的损伤原因，为建立规 现，是世界上体形最大的两柄类物种，现存陆生脊 范化的中国大鲵精液保存程序和中国大鲵人rT规模 椎动物中最低等的类群之一，具有独特的科研和经 化生产提供重要参考。 济价值【2叫】。近年来由于其生存环境不断受到人类活 l材料与方法 动的侵害，加之大鲵自身繁殖率较低，致使其数量 在不断下降，处于濒危状态，被列为国家二级保护 1．1材料来源 动物。20世纪70年代以来，国内很多学者先后开展 了中国大鲵的人T繁育工作，对中国大鲵的性腺发 国大鲵进行人工催产。将经催情注射达到效应期的 雄性大鲵捕出，擦干体表及泄殖孑L，轻压腹部取其 育f51、胚胎发育[6,71及中国大鲵的遗传结构和地理分 布【8l等方面开展了一些研究，并初步掌握了大鲵人 精液。将精液存入洁净干燥的试管中置于盛冰块的 工繁殖的技术。在巾国大鲵的人丁繁殖过程中，也 保温瓶内备用(要求精液呈乳白色、无血、无粪便)。 发现雌雄亲鲵存在着性腺发育不同步、雄鲵成熟率 I．2保存方法 低以及雌鲵产卵持续时间长等问题，因而在人丁催 低温保存 用经消毒灭菌预处理的2．0mL 产时，雄鲵产精与雌鲵产卵很难协调同步，从而导 EP管作为精液保存容器，分别置于恒温冰箱中 致中国大鲵受精率低下。本研究探讨了中国大鲵精 【(4士O．5)℃】和冰水混合物(O℃)中密闭保存。观察时 子低温和超低温保存的优化条件，同时利朋光学和 取精液lO“L，置于清洁载玻片上，低倍镜(10x10) 电子显微镜对低温和超低温保存前后中国大鲵精子 下随机选择lO个视野，观察大鲵精子的运动状态和 收稿日期：2009．10．22；修订日期：2010—06．28 基金项目：国家自然科学基金项日资助 作者简介：彭亮跃(1978一)，男