FGF6基因高表达对鼠心肌细胞凋亡和增殖的影响.pdf

No．1 第43卷第1期 温州医学院学报 V01．43 Medical Jan．2013 201 JournalofWenzhou 3年1月 College 论 著 FGF 6基因高表达对鼠心肌细胞凋亡和增殖的影响 林素，黄晓燕，王本极，潘嘉林，王良国，杨德业 (温州医学院附属第一医院心内科，温州医学院心血管生物和基因研究所，浙江温州325000) [摘要]目的：克隆小鼠成纤维细胞生长因子6(FGF6)基因cDNA的读码框(CDS)，构建携带FGF6基 因的重组真核表达载体，并将重组质粒转染至心肌细胞系H9C2细胞中进行表达，测定转染后FGF6基因对 心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法：从小鼠心脏组织提取总RNA，通过逆转录得到总cDNA，PCR法扩增，产 物连接pGEM—TEasy载体测序分析正确后，再以PCR方法扩增，将其连接入真核表达质粒PIRES2一DsRed2。 以PCR、双酶切和测序鉴定正确后，将重组载体PIRES2一DsRed2-FGF6用脂质体包裹转染大鼠心肌细胞 CountingKit．8(CCK一8)法 RT—PCR法检测转染后FGF6mRNA表达水平，荧光显微镜观察转染效率。Cell 检测转染后细胞的增殖能力；以血清饥饿诱导心肌细胞凋亡，同时进行FGF6质粒转染，流式细胞仪检测 细胞凋亡指数，Westernblot方法检测活化半胱氨酸蛋白酶3(caspase一3)表达。结果：成功克隆了小 0．05)，FGF6基因能明显抑制血清饥饿引起的细胞凋亡(尸0．05)，同时下调活化caspase一3表达(JD 体能够在H9C2细胞中获得有效过表达，并证实FGF6基因可促进心肌细胞的增殖及保护心肌细胞的凋亡。 [关键词]真核表达载体；成纤维细胞生长因子6；基因；肌细胞，心脏；细胞增殖；细胞凋亡；小鼠；大鼠 [中图分类号]R541．1；Q78[文献标志码]A[文章编号]i000—2138(2013)01-0009-06 Effectof FIG再6 on cells and LlNSu．HUANG over-expressedgenemyocardialapoptosisproliferation Jialin，WANG First Xiaoyan．WANGBemi。PAN Liangguo．YANGDeye．DepartmentofCardiology,theAffiliated Medical CardiovascularandGene Medical Wenzhou Wenzhou Hospitalof College，InstituteforBiology of college， Wenzhou，325000 cloneCDSof FGF6 mouse cDNAandconstructits 墨圆圆■Objective：To gene eukaryoticexpression vectorforitsfunctioninventriculardefect．Andthentoconstructand PIRE