TRAIL和EGFR配体寡肽与力达霉素辅基蛋白融合蛋白制备过程的优化.pdf

中国医药生物技术 2014 年 4 月第 9 卷第 2 期 Chin Med Biotechnol, April 2014, Vol. 9, No. 2 103 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2014.02.004 ·论著· TRAIL 和 EGFR 配体寡肽与力达霉素 辅基蛋白融合蛋白制备过程的优化 朱大强，陈淑珍 【摘要】 究表明，对 EGFR 通路的抑制能够增强 TRAIL 目的 对以包涵体形式表达的 TRAIL 和 EGFR 配体寡肽 的促细胞凋亡作用，也在一定程度上克服肿瘤细胞 与力达霉素辅基蛋白融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL 的制备过程 对于 TRAIL 的耐药性[4-6] 。因此，可采用 EGFR 配 进行优化。 体寡肽（EC ）的导向作用拮抗 EGFR 介导的信号 方法 对大肠杆菌原核表达 Ec-LDP-TRAIL 目的蛋白的温 传导通路，从而增加肿瘤细胞对 TRAIL 的敏感性。 度、诱导物浓度、起始菌体密度及时间等条件进行优化；在 TRAIL 和 EGFR 配体寡肽与力达霉素（lidamycin， Ni2+ 亲和层析纯化蛋白过程中对样品预处理以及纯化缓冲 LDM ）辅基蛋白组成的融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL 液成分进行优化；对纯化后蛋白的分步透析复性过程进行一 是我室以 EGFR 和 DR4/DR5 为靶点，以对肿瘤 系列优化，并通过基于 ELISA 的结合活性实验分析 细胞具有选择性凋亡诱导作用的 TRAIL 为活性 Ec-LDP-TRAIL 与肿瘤细胞的结合能力。 “弹头”，以烯二炔抗肿瘤抗生素力达霉素辅基蛋 结果 经过工艺优化后，纯化后的融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL 白 LDP 为辅运载体，通过 DNA 重组技术构建并 纯度达 95% 以上，复性后 LB 培养基活性蛋白收率约为 以包涵体形式表达的一种靶向性抗肿瘤融合蛋白。 可在体外与 LDM 的游离发色团 AE 重组，形成 2.2 mg/L ，与初始复性条件相比提高近 2 倍。复性后融合 蛋白 Ec-LDP-TRAIL 显示出能够与人表皮癌 A431 和人 具有高效抗肿瘤活性的靶向性蛋白新药 Ec-LDP- 大细胞肺癌 H460 细胞的结合活性。 TRAIL-AE 。Ec-LDP-TRAIL 和 Ec-LDP-TRAIL-AE 均已显示出良好的体内外抗肿瘤作用，具有一定的 结论 融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL 制备过程的优化为后续研 应用前景，因此，本文对此融合蛋白制备条件进行 发和生产奠定了实验基础，同时也为其他以包涵体形式表达 了优化。 的基于 TRAIL 的抗肿瘤蛋白药物的制备提供借鉴。 众所周知，包涵体蛋白本身没有活性，以包涵 【关键词】 包涵体； 重组融合蛋白质类； 蛋白质复 体形式表达的融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL 需通过纯 性； 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 化、复性等过程才能发挥对 EGFR 和 DR4/DR5 中国医药生物技术, 2014, 9(2):103-109 以及多种肿瘤细胞的生物学作用。当前，融合蛋白