人MxA基因的原核表达及其抗血清的制备.pdfVIP

·18· 生物技术 中国畜牧兽医 2013年第40卷第4期 人MxA基因的原核表达及其抗血清的制备 辛婷婷1’2，王洪梅2，刘文浩2，孙涛2，王立群1，何洪彬2 (1．东北农业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨 250100) 150030；2．山东省农业科学院奶牛研究中心，山东济南 ern blotting检测结果显示，抗血清可与真核表达的MxA蛋白进行特异性结合。试验结果表明，在大肠杆菌中成功表达了 干扰素诱导的细胞产生的MxA蛋白质含量及临床诊断试剂盒的开发和应用打下了基础。 关键词：MxA；原核表达；抗血清 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1671—7236(2013)04—0018—04 人源Mx蛋白是由Aebi等(1989)首次发现，是测及功能活性的进一步研究奠定基础。 一种由I型(d／8)和Ⅲ型(入)干扰素(IFN)诱导的具1材料与方法 1．1 材料 有GTPase活性的抗病毒蛋白(Holzinger等， 1．1．1 菌株、质粒、菌种和细胞 人肝脏cDNA、 2007)。人源Mx蛋白根据等电点(PI)的不同分为 MxA(PI7)和MxB(PI7)，MxA基因位于人21 号染色体长臂上(Gardiner等，1990)，经IFNu／13处 细胞均由山东省农业科学院奶牛研究中心保存；大 理可诱导产生78ku的MxA蛋白，分布于细胞的胞 浆内(Stertz等，2006)，这种胞浆蛋白能抑制多种 程(大连)有限公司。 RNA病毒和DNA病毒的作用(Christopher等， 1．1．2 工具酶和主要试剂 LA DNA 2009)，包括正黏病毒科、弹状病毒科和布尼亚病毒 Taq酶、T4 I和Xho工、dNTP、 连接酶、限制性内切酶BamH 科的一些病毒(Haller等，2007)，这一点是其区别 DL5000DNA 于其他dynamin家族成员的显著特点(Reichelt等， Marker、质粒DNA纯化试剂盒、 DNA胶回收试剂盒均购自宝生物工程(大连)有限 2004)，而MxB未发现有抗病毒活性(Lee等， 2002)。本试验采用PCR方法克隆了MxA的蛋白 质编码序列，并进行了全基因的原核表达，将纯化的 蛋白质纯化系统均购自Invitrogen公司；弗氏完全 佐剂、弗氏不完全佐剂、辣根过氧化物酶标记羊抗兔 融合蛋白pET32a(+)一MxA，免疫新西兰兔以获得 具有高活性的多克隆抗体，为MxA蛋白的临床检 IgG均购自Sigma公司；其他试剂均为进1：3分装。 1．1．3试验动物2～3kg新西兰白兔购自山东 收稿日期：2012-09—24 省农业科学院种兔实验基地。 作者简介：辛婷婷(1987一)，女，山东人．硕士生，研究方向：微 1．2 方法 生物。 1．2．1 通信作者：王立群(1956一)，男，教授，硕士，硕士生导师，从事应 用微生物研