raav2导gdnf联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究.pdfVIP

rAAV2 介导GDNF 联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究 中文摘要 中文摘要 研究目的：本实验以雄性SD 大鼠为研究对象，造模后应用rAAV2 介导GDNF 联合早期康复训练对脊髓损伤的大鼠进行实验研究，采用运动学评分、组织形态 学和免疫组化等技术，通过分析脊髓损伤大鼠在不同时间点后肢运动功能的变化、 损伤脊髓处 GDNF 的蛋白表达、运动神经元形态和数量的变化等，比较早期康复 训练、基因治疗以及这两种因素的联合作用对脊髓损伤大鼠恢复的影响。 研究方法：本实验采用了rAAV2 介导GDNF 基因治疗、早期康复训练及两者 联合三种方法对脊髓重物打击造模后的大鼠进行干预：雄性SD 大鼠90 只，随机 分为假手术组（n=18 ）、自然愈合组（n=18 ）、基因治疗组（n=18 ）、康复训练组（n=18 ）、 联合治疗组（n=18 ），其中每组按照取材时间点不同随机分为造模后7d 组（n=6 ）、 14d 组（n=6 ）、21d 组（n=6 ）。对基因治疗组、联合治疗组大鼠造模成功后24h 注 射携带有人 GDNF 基因的重组腺相关病毒。对康复训练组、联合治疗组大鼠在造 模成功后第 3d 开始早期康复训练。测试方法与指标：①通过 BBB 评分、斜板实 验来评价脊髓损伤大鼠运动功能的改善。②HE 染色观察损伤后大鼠脊髓运动神经 元、神经胶质细胞的形态数量变化。③荧光显微镜下观察rAAV2-GDNF-GFP 在损 伤脊髓处的表达。④免疫组化实验采用SABC （StreptAvidin-Biotin Complex ）试剂 盒来检测损伤脊髓组织中GDNF 的抗原分布，观察GDNF 的蛋白表达。 研究结果：①运动学评分得出对脊髓损伤大鼠运动功能的恢复，康复训练组 的效果好于基因治疗组，且7d 时有显著性差异 （P0.05 ），14d、21d 时有非常显 著性差异（P0.01 ）。②HE 染色切片观察得出对运动神经元的保护作用，基因治 疗组要好于康复训练组，且在第7d 时有显著性差异 （P0.05 ）。③免疫组化的结果 表明康复训练组的GDNF 平均光密度值高于自然愈合组，且第7d 时有显著性差异 （P0.05 ），14d、21d 时有非常显著性差异 （P0.01 ）。④运动学评分、损伤后运 动神经元存活的数量、rAAV2-GDNF-GFP 感染效率及GDNF 的蛋白表达，联合治 疗组的效果是最好的，且与其它各组相比，在7d、14d 均有显著性差异 （P0.05 ）。 研究结论：①rAAV2-GDNF-GFP 在细胞水平上具有感染 293T 细胞能力并且 可以表达GDNF 蛋白，在组织水平上，损伤区脊髓组织中GDNF 在转录和蛋白水 平均有表达，其中 14d 时平均光密度值是最高的。②早期康复训练可以使大鼠后 I 中文摘要 rAAV2 介导GDNF 联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究 肢的运动功能得到明显的改善，在 7d-14d 恢复较快，并且对损伤大鼠脊髓中的 GDNF 表达有促进作用，在 14d 时效果最明显。③rAAV2 介导的GDNF 基因治疗 能保护受损的脊髓前角运动神经元，显著提高损伤脊髓处 GDNFmRNA 和蛋白的 表达水平，对脊髓损伤大鼠后肢功能的恢复有促进作用。④联合治疗在促进大鼠 后肢运动功能的恢复、对损伤脊髓前角运动神经元的保护作用及 GDNF 在损伤脊 髓区的表达效果都是最好的，多种方法联合治疗是脊髓损伤治疗的发展趋势。 关键词：rAAV2 ；GDNF ；早期康复训练；脊髓损伤 作 者：韩清泉 指导老师：沈勇伟 II rAAV2 介导GDNF 联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究 英文摘要 Experimental research on acute