raav2导igf-1基因治疗联合康复训练对大鼠脊髓损伤修复作用的研究.pdfVIP

rAAV2介导IGF-1基因治疗联合康复训练 对大鼠脊髓损伤修复作用的研究 中文摘要 中文摘要 研究目的： 本实验对大鼠进行脊髓损伤造模后，应用重组腺相关病毒载体 （rAAV2）介导 胰岛素样生长因子-1 （IGF-1）基因治疗和康复训练联合干预。采用运动功能评分、 组织学和免疫组化等技术，观察大鼠脊髓损伤修复过程中不同时间点后肢运动功 能、损伤脊髓局部神经元数量、损伤组织IGF-1表达等指标。比较单纯基因治疗、 单纯康复训练和基因治疗联合康复训练对脊髓损伤的修复效果，丰富相应研究资料。 研究方法： 研究对象为90只雄性SD大鼠，脊髓损伤造模后随机分为5组：假手术组、 自然愈合组、康复训练组、基因治疗组、联合治疗组（基因治疗联合康复训练）； 14d 28d 42d 6 24h 各组再分别设 组、 组、 组（每组 只）。基因治疗组造模后 脊髓 注射3u 重组腺相关病毒，康复训练组造模后7d进行游泳训练，联合治疗组同时 施加上述两种治疗方法。跟踪测试各组不同时间点下列指标：脊髓组织形态变化、 IGF-1表达、脊髓前角运动神经元数量，后肢运动功能BBB评分、斜扳试验评分。 其中BBB评分和斜板实验分别于造模后1d、3d、7d、14d、28d、42d测试，组织 学和免疫组化取材时间点为14d、28d、42d游泳训练后2h。实验结果采用SPSS17.0 统计软件进行分析。 研究结果： （1）重组腺相关病毒介导的GFP绿色荧光蛋白能够在脊髓组织损伤区域的神 2 IGF-1 经元和神经胶质细胞中广泛表达，对照组无表达。（）伤后各组 表达都显 著高于假手术组（P0.05）；随修复时间14d、28d、42d 自然愈合组呈下降趋势， 到第42d基本接近正常水平。其余各组表达稳定，组内比较无显著下降；第42d 各组IGF-1量由高到低为联合治疗组、基因治疗组、康复训练组、自然愈合组、 假手术组，各组间差异非常显著（P0.05）。（3）伤后各组运动神经元数量均非常 显著低于假手术组（P0.01）；14d、28d、42d各组运动神经元数量无明显变化， 42d 68% 组内比较无显著差异；第 运动神经元存活数由高向低为：联合治疗 （ ）、 基因治疗组 （66%）、康复训练组 （39%）、自然愈合组 （17%），除联合治疗组和 I 中文摘要 rAAV2介导IGF-1基因治疗联合康复训练 对大鼠脊髓损伤修复作用的研究 P0.01 4 BBB 基因治疗组无显著差异外，其余各组间差异非常显著 （ ）。（）各组 评 分和斜板评分趋势相同，于造模后降到最低，此后缓慢升高。1d、3d、7d各组间 运动评分无显著差异。第 14d和28d，联合治疗组BBB评分和斜板评分非常显著 P0.01 P0.01 高于其余各组（ ）；康复训练和基因治疗组也显著高于自然愈合组（ ）， 但两组间无差异；第42d各组运动评分由高向低为联合治疗组、康复训练组、基 因治疗组、自然愈合组，除康复训练与基因治疗组差异为显著外 （P0.05），其余 各组差异均非常显著（P0.01）。 研究结论： （1）重组2型腺相关病毒 （rAAV2）能够高效感染脊髓神经组织，并介导外