黄芪多糖对内毒素致小肠上皮细胞损伤保护作用.pdf

·中文论著摘要· 黄芪多糖对内毒素致小肠上皮细胞损伤的 保护作用 刖 胃 肠上皮细胞是肠道粘膜屏障的重要组成部分，同时被认为在宿主粘膜表面的 天然及获得性免疫系统中起中心调节作用，是宿主与病原微生物双向联系的第一 道防御。一些肠道疾病和非肠道疾病均可引发肠功能障碍，各种病理因素如创伤、 休克、严重感染等重症应激状态时，全身免疫功能低下，大量肠道内细菌和内毒 素LPS侵入体循环及肠组织中，造成细菌移位和肠源性内毒素血症，从而进一步 加剧肠上皮细胞的损伤，激活细胞内一系列的免疫反应，导致一些炎症介质如 TNF．o‘、IL．6、IL．8、血小板激活因子等大量的产生和释放，引起全身炎症反应综 合征(S麟)，启动并加速多系统器官功能衰竭(MSOF)。研究LPS介导的肠上 皮细胞损伤已经成为一个广泛注意的研究领域。近年来已经取得很大进展。 NF．1cB是肠道免疫功能相关的许多基因表达的关键调节因子，它为许多细胞 中起着不可缺少的作用。目前已经明确，LPS作用下，肠道上皮细胞内NF．1cB可 被激活，高效诱导多种细胞因子(IL．1、IL一6、IL．8、TNF、粒细胞．巨噬细胞集落 刺激因子)，粘附分子等的基因表达增加，同时对参与炎症反应的放大与级联瀑布 效应的多种酶的基因表达也具有重要的调控作用。由于NF．1cB的激活是目前所认 识的导致肠道炎症损伤的重要通路，因此以这条通路出发，研究阻断NF．1出激活 途径以阻断调控炎症反应蛋白合成，达到抑制炎症反应的作用是治疗肠道损伤的 一个很有前景的途径。 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是一类细胞内广泛分布的丝氨酸／苏氨酸残基的 蛋白激酶，是一族连接细胞膜表面受体与决定性基因表达之间的重要信号调节酶。 在哺乳细胞至少已克隆了四个MAPK亚族。分别为细胞外信号调节激酶 (ERKl／ERK2)、cJun氨基末端激酶(JNKl／JNK2)、P38MAPK(a、p)和ERK5。 MAPK被激活后可停留在胞质中，激活一系列其它蛋白激酶，使细胞骨架成分磷 酸化，亦可经核转位进入细胞核激活各自的核内转录因子，使其发生磷酸化，从 而启动某些基因表达，促进有关蛋白质的合成和通道改变，完成对细胞外刺激的 化及COX-2表达增强，并具有剂量依赖性。这项研究从体外实验角度证实了 的信号调节，影响着基因表达、介质释放和细胞内其他信号通路，参与了肠道细 胞的促炎因子释放等损伤过程，因此在信号通路水平阻断和调控MAPK信号分子 的表达和活性将为治疗肠道损伤提供新的思路和途径。 黄芪为我国传统中药，因其低毒、副反应小且具有增强和恢复免疫功能等作 用，目前国内已经将其应用于防治肿瘤、免疫功能低下和免疫缺陷等疾病，发挥 其增强免疫和免疫调节剂的作用。黄芪多糖是黄芪发挥作用的一种重要的单体成 分。王立新等给内毒素处理小鼠腹腔注射黄芪多糖，发现它能拮抗内毒素引起的 肝匀浆中丙二醛(MDA)升高及还原型谷胱甘肽(OSH)降低，对内毒素处理小鼠肝脏 线粒体结构的损伤有保护作用。路景涛研究证实黄芪多糖能够抑制细菌脂多糖诱 导大鼠腹腔巨噬细胞释放的肿瘤坏死因子、白细胞介素和一氧化氮的分泌，故体 内实验研究已经说明黄芪多糖可以通过抑制炎症因子的分泌从而减少组织细胞的 损伤来发挥其对机体的免疫保护作用。 目前国内外关于黄芪多糖作用的机理研究较多，但尚无关于黄芪多糖是否对 LPS导致的肠道损伤具有保护作用的研究，以及这种保护作用是否与信号转导通 路有关。本研究即是以肠上皮细胞IEC．6为研究对象，研究LPS导致IEC．6细胞 损伤后，黄芪多糖是否能有效的促进上皮细胞增殖从而起到肠粘膜屏障修复作用； 是否通过抑制MAPK／NF．KB信号转导通路从而抑制炎症因子释放，发挥其肠道免 疫保护作用。通过研究旨在探讨黄芪多糖发挥肠道保护作用的调节作用机制，从 而为其临床应用提供理论依据。 2 实验方法 一、材料 IEC．6细胞株购自中国医学科学院肿瘤医院生物检测中心。将IEC．6细胞株复 培养箱(37℃，5％C02)中培养；次日换液，至80％左右融合时，0．25％胰酶消 化传代，5天传代一次，传代5次后的细胞用于实验分组。 将培养的细胞随机分为五大组： 1组：空白对照组：以DMEM培养液为空白对照； 2组：单纯LPS组：