鸭腺病毒蜂胶灭活疫苗的研制及免疫原性的研究.pdfVIP

鸭腺病毒蜂胶灭活疫苗的研制及其免疫原性研究 纪风……学，I嗍嗖燃 指导教师：蒋文灿 摘 要 以鸭胚尿囊腔途径增殖鸭腺病毒，24．120h死亡鸭胚和120h后未死亡鸭胚置4℃ 冰箱过夜，无菌操作分别收集尿囊液。对鸭腺病毒连续传代，选择传代稳定的鸭胚尿 囊液作为种毒，种毒鸭胚半数感染量为10‘7’5I／0．2ml，HA价1：216。用种毒制备疫苗 抗原，加O．3％甲醛、37℃灭活48h，加蜂胶佐剂，制备鸭腺病毒蜂胶灭活苗，蜂胶 最终含量10 mg／ml，疫苗安全检验合格。 建立了间接ELISA法检测鸭腺病毒抗体。ELISA最佳反应条件为：鸭腺病毒抗 原包被浓度2．45 rain。HRP一羊抗鸭IgG稀 pg／ml，血清稀释倍数1：100，作用时间90 释度为1：2 大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、沙门氏菌阳性血清无交叉反应， 特异性好。 用制备的鸭腺病毒蜂胶灭活疫苗免疫实验鸭，以间接ELISA和血凝抑制试验监 d就可在血清 测免疫鸭抗体消长规律。ELISA结果显示：一次免疫组种鸭免疫后第3 中检测到血清呈阳性，第14 d时抗体达到峰值(OD=0．628)随后缓慢下降，到免疫后 56天仍为阳性；二次免疫组种鸭首免后第7d免疫第二次，共免疫2次，21d到达峰 (P0．05)，经过二次免疫种鸭的抗体水平更高。免疫组的抗体水平显著高于对照组 (P0．05)。血凝抑制试验结果显示：一免后第3d时可以检测到抗体效价，值为23‘83。 d．14 在免疫后的3 d抗体上升的最快，并达到最大值211‘52，然后开始缓慢下降，到免 疫后56d抗体效价任保持在29‘38的较高水平。在首免后第7d进行二次免疫，结果显 示，在首免后第21d达到峰值，效价高达216。以后缓慢下降，56d时的抗体效价为 万方数据 21330。在测定的整个过程，同时间点二次免疫组的抗体水平都高于一次免疫组，两个 实验组的抗体水平都显著高于生理盐水对照组。ELISA法的敏感性高于血凝抑制试验 方法，两者呈平行关系。 用制备的鸭腺病毒蜂胶灭活疫苗免疫实验鸭，以MTT法和白细胞吞噬试验监测 免疫鸭细胞免疫应答。MTT法检测鸭外周血淋巴细胞转化活性结果显示：一次免疫 组在免疫后第3d检测发现T淋巴细胞对ConA反应增强，且显著高于对照组 (Po．05)。到第10 d到达峰值，然后快速下降。二次免疫组在首免后10．14d，T淋 d、 巴细胞转化活性最高，随后逐渐下降。在本实验的整个测定过程中，在首免后第10 14d、21 d、28 在42 d时两个试验组和对照组差异均不显著。白细胞吞噬试验结果显示：一次免疫 组白细胞吞噬指数在免疫后21 d达到最大值，吞噬指数为3．03，然后快速下降。二 次免疫组白细胞吞噬指数一直大于一次免疫组和对照组，并且在首免后21d到达最 大值。 关键词：鸭腺病毒；蜂胶；体液免疫；细胞免疫 万方数据 of and Technology DevelopmentPreparation Potency Testsof uvantInact