蓝萼甲素对缺氧缺血性脑损伤的保护作用与研究.pdfVIP

蓝萼甲素对缺氧缺血性脑损伤保护作用的研究 中文摘要 中文摘要 新生儿缺氧缺血性脑损伤（hypoxic ischemic brain damage ，HIBD ）是指围产 期窒息导致大脑的缺氧缺血性损害，是造成新生儿死亡、神经功能失调的主要原 因之一。在发展中国家，每 1000 名足月新生儿就有 1-3 名患有缺氧缺血性脑病 （hypoxia- ischemia encephalopathy，HIE ），该病死亡率较高，并可导致终生残疾。 我国每年出生的新生儿有 160～220 万发生窒息，其中40 万左右因重度脑损伤遗 留瘫痪、癫痫、智力障碍等不同程度的残疾。新生儿时期脑发育是大脑发育关键 期，一旦发生HIE ，需积极、及时采取综合治疗的措施。为减少后遗症的发生，必 须坚持恢复期治疗及早期干预康复治疗。目前治疗 HIE 的常用药物包括红细胞生 成素、脑代谢激活剂、丹参、纳络酮及各类神经营养因子等。文献证实头孢曲松、 环孢霉素 A 、NEP1-40 、法舒地尔等心血管系统药物可以减轻缺氧缺血造成的脑 损伤；还有研究报道阳雀花根等中药可显著提高小鼠抗缺血缺氧能力。本文也是 致力于研究其他中草药对新生大鼠 HIBD 的保护作用，希望能为缺氧缺血性脑病 患儿提供更加可靠、及时的药物治疗。 现代药理研究表明，蓝萼香茶菜的乙醇提取液能减轻心肌缺血-再灌注损伤， 保护心肌；蓝萼甲素可以通过抗血小板作用起到活血、心肌保护作用。并有研究 证明蓝萼甲素具有抗凝血的作用。鉴于蓝萼甲素这些疗效，我们提出蓝萼甲素可 能对新生儿缺氧缺血性脑病也具有保护作用的设想，因此，我们用新生大鼠建立 缺氧缺血性脑损伤HIBD 实验动物模型来模拟HIE ，观察蓝萼甲素对新生儿HIBD 的保护作用，并对其机制进行了研究。希望本研究能够为未来蓝萼甲素用于缺氧 缺血性脑病患儿治疗提供实验依据。 实验方法： 1、蓝萼甲素的分离提纯。蓝萼甲素是从唇科香茶菜属植物香茶菜中提取分离出的 二萜化合物。 2 、建立HIBD 实验动物模型。实验动物选用出生7 天的Sprague-Dawley 大鼠，将 选定大鼠随机分为三组：HI 手术组（n=50 ）、蓝萼甲素处理组（n=55 ）、假手 术组（n=50 ）。出生7 天的Sprague-Dawley 大鼠行右侧颈总动脉永久性结扎后 I 中文摘要 蓝萼甲素对缺氧缺血性脑损伤保护作用的研究 持续缺氧2.5 小时，建立HIBD 实验动物模型。 3、缺氧缺血（HI ）手术4 周后，大鼠断头取脑，观察比较手术组手术侧和对照侧、 HI 手术组与假手术组大脑的发育情况，判断缺氧缺血对大脑发育的影响。 4 、缺氧缺血（HI ）手术4 周后，进行Morris 水迷宫定位航行和空间探索试验，研 究缺氧缺血对新生大鼠远期学习记忆能力的影响。 5、TTC 染色检测蓝萼甲素对新生大鼠HIBD 是否有保护作用。在缺氧缺血中间恢 复时，蓝萼甲素处理组腹腔注射蓝萼甲素。HI 手术48 小时后，将大鼠断头取 脑切成2mm 厚度切片，TTC 染色观察脑梗死情况。对比HI 手术组和蓝萼甲 素处理组脑梗死情况，判断蓝萼甲素对脑损伤是否具有保护的作用。 6、研究蓝萼甲素对新生大鼠HIBD 保护机制。HI 手术后24 小时，大鼠断头取脑 提取脑组织蛋白，通过免疫印迹（western blotting ）研究相关机制，检测细胞 凋亡情况。 实验结果： 1、通过观察手术后脑发育情况以及神经行为学结果，证明HIBD 实验动物模型建 立成功。 2 、手术后4 周，通过对比假手术组和HI 手术组大脑发育情况，发现HI 手术组手 术侧脑半球出现明显萎缩情况（n=20 ，p0.001 ），对侧脑半球正常；假手术组 大鼠大脑左右两侧均正常，说明缺氧缺血会严重影响大脑发育。 3、Morris 水迷宫定位航行试验结果显示，HI 手术组大鼠寻找平台潜伏期时间明显 长于假手术组（n=10 ， P 0.01 ）。空