抗氧化剂和自由基和血清白蛋白相互作用的微量热和谱学的研究.pdf

摘要 自由基是生物体内各种生化反应的中间体，由于存在未配对的电子，自由基具有很 高的化学活性。正常情况下，自由基对生物体的生理调控必不可少。但是，当其产生过 量或没有合理控制时，自由基就会表现出危险性，对脂质、核酸、蛋白质等生物大分子 的结构和功能造成损伤。大量生物化学、生物学和临床医学研究表明，自由基对蛋白质 造成的氧化损伤是许多慢性病的发病机理，也是导致衰老的主要原因。抗氧化剂可以提 供氢原子或电子中和自由基的单电子。合理的补充抗氧化剂对维持身体健康、延缓衰老、 预防或治疗疾病具有重要意义。自由基、抗氧化剂和蛋白质三者关系密切，自由基可以 对蛋白质造成氧化损伤，而抗氧化剂可以清除自由基从而对蛋白质起到保护作用，同时 抗氧化剂也可以与蛋白质相互作用导致蛋白质构象的变化。因此，研究抗氧化剂、自由 基、蛋白质的相互作用机制十分重要。 本文得到国家自然科学基金资助课题(No和教育部高等学校博士点专项 141041 基金(No．201 10002)资助，主要从以下四个方面开展研究工作：(1)抗氧化剂和自 由基的相互作用；(2)自由基与蛋白质的相互作用；(3)抗氧化剂和血清白蛋白的相互 作用：(4)抗氧化剂、自由基和蛋白质三元体系的相互作用。主要研究内容和结论如下： 酰肼基)自由基的能力以及它们之间的相互作用机制。结果表明HSA／BSA清除DPPH自 由基的能力和谷胱甘肽类似。DPPH自由基与HSA／BSA的荧光猝灭机理为静态猝灭。 DPPH自由基和HSA的结合存在两类不同的结合位点，结合数约为2，即一分子的HSA 可以和两分子的DPPH自由基反应。DPPH自由基和BSA只有一类结合位点，结合数 的相互作用对色氨酸微环境有一定影响，但对酪氨酸微环境的影响不明显。 2．采用紫外．可见吸收光谱研究了抗氧化剂(L．抗坏血酸、仅．生育酚、B．胡萝卜素、 虾青素、(+)-儿茶素、原花青素B3、谷胱甘肽、褪黑激素)清除DPPH自由基、羟基自 由基以及超氧阴离子自由基的能力，其中原花青素B3清除DPPH自由基的能力最强， 虾青素清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力最强。 3．在模拟生理条件下，通过等温滴定量热技术结合荧光光谱，紫外一可见吸收光谱， 傅里叶红外光谱，圆二色谱以及分子模拟等方法，详细探讨了上述八种抗氧化剂与血清 白蛋白的相互作用机制以及所引起的血清白蛋白构象的变化。研究结果表明不同的抗氧 化剂与HSA／BSA的作用机制有所不同。L．抗坏血酸通过“非特异性”表面吸附结合到 猝灭HSA／BSA的内源荧光。洳生育酚与HSA／BSA为形成复合物的“特异性”结合， 荧光猝灭机理为静态猝灭，结合在HSA／BSA位置II的疏水空腔内。p．胡萝卜素和虾青 素与HSA／BSA的相互作用均为熵变和焓变协同驱动的自发过程，疏水和静电的综合作 用是其主要的作用力类型，结合位置位于HSA／BSA的位置1和位置II的界面处，部分 插入位置I的疏水空腔。(斗．．儿茶素／原花青素B3与HSA的结合为有利的焓变和不利的 熵变共同作用的结果，主要作用力是氢键和范德华力。(+)．儿茶素／原花青素B3与BSA 的结合是焓变和熵变共同驱动所导致，静电和疏水作用是结合的主要作用力。(+)-儿茶 素和原花青素引起HSA／BSA荧光猝灭机理均为形成基态复合物的静态猝灭，结合位置 机制不尽相同，但它们与HSA／BSA的结合常数均处于适中的范畴，利于其通过循环系 统运输，并以合适的浓度到达各自的靶位置发挥药效。另外，这八种抗氧化剂与 HS舳SA的相互作用导致HSA／BSA二级结构中a．螺旋组分出现不同程度的降低，使 血清白蛋白出现部分去折叠现象。 4．通过荧光光谱研究了抗氧化剂、DPPH自由基和血清白蛋白三元体系的相互作用 机制。研究表明三元体系的荧光猝灭机理为形成复合物的静态猝灭。结合常数和结合位 点数与DPPH-HSA侣sA二元体系相比均有不同程度的降低，表明这八种抗氧化剂可以缓 解DPPH自由基对血清白蛋白造成的氧化损伤，对血清白蛋白起到保护作用。 关键词：自由基，抗氧化剂，血清白蛋白，作用机制，清除自由基能力 II ABSTRACT ina ofnormalbiochemicalreactions．A Freeradicalsare intermediates