一株海参共附菌的活性及其应用初步的研究.pdf

Thesis for the Degree of Master The Preliminary Research Activity and Application of a Strain Cucumber’s Epiphytic Bacteria Supervisor: Associate Prof. Zhang fuyun Master Candidate: Liu ye COLLEGE OF FOOD ENGINEERING DALIAN OCEAN UNIVERSITY DALIAN, LIAONING PROVINCE, CHINA JUNE 2014 本研究由辽宁省大连市科学技术基金项目（2010J21DW017 ）和 大连海洋大学2012 年校列科研项目（2012HYDX15 ）资助。 摘要 摘 要 海洋动物具有多种生物活性物质及丰富的共附微生物，对于资源稀缺的当今社会来 说，具有潜在的开发和利用前景。共附微生物及其产生的代谢产物进行进一步研究，探索 生物活性，发掘其在食品、药品、养殖业及其它领域的潜能，为其打开新的发展空间奠定 了基础。 本研究以海参共附生枯草芽孢杆菌 22 号菌株及其代谢产物粗蛋白、多糖进作为研究 对象，进行了蛋白稳定性、多糖组分的初步分析、抗菌试验、抗氧化性试验、体外抗肿瘤 试验以及多糖对MMC 诱导的蚕豆根尖细胞微核试验等活性进行研究。 蛋白稳定性试验研究表明，22 号菌株粗蛋白对紫外光照射具有较好的稳定性，但该粗 蛋白在胰蛋白酶、蛋白酶K 、温度以及pH 作用下易丧失抑菌活性。22 号菌株粗蛋白在–20 ℃、 –4 ℃、20 ℃、40 ℃储存6 个月蛋白的生物活性没有明显变化。22 号多糖经红外光谱以及气 相色谱分析，多糖的吸收特征峰表明其含有-OH、-CH 、-C=C-、-COOH、C-O-C、C-OH、 2 -O-SO 等官能团。多糖的构成单糖组分比较单一，主要由阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖醛酸 3 组成。 抑菌试验表明，22 号菌株粗蛋白对苹果粉红、辣椒青枯、番茄灰霉、雪霉叶枯、串珠 镰刀菌、西瓜枯萎、玉米早疫、瓜类枯萎、番茄早疫均有抑制作用。22 号菌株多糖对苹果 粉红、辣椒青枯、番茄灰霉、雪霉叶枯、串珠镰刀菌、玉米早疫、瓜类枯萎这7 种真菌具 有抑菌活性。22 号枯草芽孢杆菌菌体对植株番茄灰霉病试验结果表明，其对番茄灰霉病有 较强的抑制作用，对接种病原菌的番茄植株机体内的SOD 酶、MDA 酶、PAL 酶、PPO 酶、 POD 酶都有一定的有益影响 22 号菌株蛋白和多糖抗氧化试验表明，22 号菌株粗蛋白与多糖分别对羟自由基与超 氧阴离子具有清除作用。22 号菌株粗蛋白在浓度为1 mg/mL 时对超氧阴离子自由基与羟自 由基清除率分别为45.40%和39.77% 。22 号菌株多糖在浓度为1 mg/mL 时对超氧阴离子自 由基与羟自由基清除率分别为34.66%和22.45% 。 体外抗肿瘤活性试验表明，22 号菌株粗蛋白和多糖均对神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y P7 ）有抑制活性。当22 号菌株粗蛋白浓度为360 μg/mL 时，抑瘤率28.88% 。22 号多糖对 肿瘤细胞SH-SY5Y P7 也具有一定的抑制作用，在360 μg/mL 时，抑瘤率为21.44% 。 22 号多糖对MMC 诱导的蚕豆根尖细胞微核形成的试验可得，22 号多糖对细胞微核的 形成具有明显的抑制作用，当浓度为250 μg/mL 时，抑制率最高可达53.91% 。 关键词：海参共附生菌；抑真菌；抗肿瘤；抗氧化；微核 I Abstract