与已知酵母转录激活结构域.pptVIP

酵母单杂交系统 吉林大学 植物科学学院 2010级硕士 酵母单杂交系统原理 质粒和菌株 质粒：诱饵质粒pHIS2，文库质粒为pGADT7-rec2 诱饵质粒上连接有目标靶序列，最小启动子和报告基因 文库质粒则和反转录得到的真核生物cDNA连接，可以表达AD杂合蛋白 酵母菌株：Y187 GAL4基因是缺失型的；基因组中引入 额外的报告基因LEU、TRP、 HIS 报告基因 常用的酵母单杂交体系基本选用HIS3或者LacZ作为报告基因，虽然有的体系将带有报告基因的载体直接整合与酵母染色体上，在大部分实验中报告基因都位于质粒DNA上 LacZ reporter - Blue/White Screening HIS3 reporter - Screen on His+ media (usually need to add 3AT to increase selectivity) 基本流程 1. 筛选含有报道质粒的酵母细胞 具体过程为： 合成靶序列； 将靶序列插入pHIS2载体的多克隆位点； 一般为将0.1mg pHIS2质粒用EcoRⅠ和SacⅠ进行完全双酶切，T4连接酶连接，靶序 列： pHIS2质粒=5：