家蚕茧丝突变种Nd-%27x-突变机理初步及研究.pdfVIP

中文摘要 家蚕茧丝突变种Nd突变机理初步研究 生物化学与分子生物学专业硕士研究生 陈玉琳 指导教师 夏庆友教授 (摘要) 丝腺是家蚕唯一能合成、分泌绢丝物质的外分泌腺，也是昆虫中蛋白质合成能力最强的 生物器官，因而它是整个蚕丝业的生物学基础，具有重要的经济价值。家蚕丝腺从形态和功 白流通的管道，中部和后部丝腺有强大的合成丝蛋白(丝素和丝胶)的能力。其中中部丝腺 合成和分泌丝胶蛋白，而后部丝腺则合成和分泌丝素蛋白。同时，家蚕丝腺是内复制组织， 其细胞内的基因组没有有丝分裂和核分裂，而是进行多次的复制；没有进行正常的有丝分裂， 细胞周期实质上就是G1期与S期之间的交替。 批，(系统编号：02-030)是本研究所基因库保存的一种茧丝突变种，其突变性状表现为 绢丝腺退化及半数不能正常吐丝结茧，经遗传连锁分析定位到与丝素重链同在的第25号染色 体。在本研究中，选用Nd-s(系统编号：02-020)及大造作为对照，解剖不同发育时期丝腺， 经DAPI染色后计数其丝腺细胞数和观察丝腺细胞的发育情况。蚁蚕时期丝腺细胞数的统计结 果表明，三个品种的中部丝腺和后部丝腺在细胞数目上并无显著性差异；而在5龄初期，Nd 后部丝腺的发育明显比对照发育慢，特别是在长度上，其长度为对照的l／2左右；到上簇时， 其长度只为对照的1／4左右；而中部丝腺差异不大。对丝腺细胞核的染色观察发现，5龄期， Nd突变种的中部丝腺的细胞核分裂与对照相比无差异，均呈树突状分裂；而后部丝腺细胞只 发生纵向扩展，无正常家蚕丝腺细胞的树突状分裂。由此认为，该突变种丝腺的退化并不是 真正的细胞数减少或者发育过程中萎缩，而是后部丝腺细胞核的分裂过程发生异常从而造成 后部丝腺的短小，推测该突变基因与细胞核的分裂有关。 对肘突变位点所在的家蚕第25号染色体进行信息分析，结果表明该染色体有436个基 因，其中364个基因与数据库中蛋白质具有相似性，具有功能注释；72个基冈与其它蛋白无 任何相似性，即它们是未知功能或假设蛋白基因。再对具有功能注释基因进行GO分类后得知， 该染色体基因的功能与细胞组分、细胞器组分、结合活性、催化活性、生理调：肖、细胞过程、 I 两南人学硕卜研究生学侍 新陈代谢过程、色素沉着等有关；具有结合活性、催化活性、新陈代谢功能的第25号染色体 基冈占了人多数。采用信号强度大于300作为基冈表达的阂值，我们通过对门一化芯片数据 进行筛选，筛选剑25号染色体上9个丝腺特异表达的基因探针；其中在其它组织有表达(信 号强度300)、但在丝腺是高量表达(10倍其它组织表达量)的有3个，仅在丝腺表达的有 6个；它们是参与保幼激素调节、丝素H链转录调控、胞内物质运输等功能的重要丝腺基冈。 同时，也筛奄发现在25号染色体上有6个保幼激素酯酶基冈存在，但仅两个是在丝腺特异表 达的，特别在MSG中高量表达。 由于Nd(2)与Ndr是等位突变品种，前人对Nd(2)的研究结果表明，该突变品种很有可能 是fib．H蛋白C端的二硫键发生突变。因此，本研究对fib-H蛋白c端的编码序列进行了不同 品种间的测序比较，结果表明，肘的fib—H的C端区域与大造完全一样，没有发生突变；同 明它们的所测序列没有发生变化，半定量RT-PCR也无表达水平的差异，因此，我们也认为， 由该两个基冈引起Nat突变的可能性不大。通过我们的研究，我们排除了Nd位点的突变是由 fib-H的二硫键引起的可能，导致该突变的真正基因还有待进一步研究。 关键词：家蚕肘突变后部丝腺核内复制特异表达 Il Abstract PreliminResearchofMutation ary MechanismofSilkwormFibroinMutant Masterof andMolecular Biochemistry Biology Candidate：YulinChen