硒-汞双元素标记策略识别硒蛋白-多肽.pdfVIP

第43卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 特约来稿 第9期 2015年9月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 1265~1271 DOI:10.11895/j.issn.0253-3820.150327 硒-汞双元素标记策略识别硒蛋白/ 多肽 1,2 1 *1 徐 明 杨利民 王秋泉 1(厦门大学化学化工学院化学系谱学分析与仪器教育部重点实验室,厦门361005) 2(中国科学院生态环境研究中心 环境化学与生态毒理学国家重点实验室,北京 100085) 摘 要 提出并发展了一种基于电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)的双元素标签标记策略来选择性识别和检 测硒蛋白/ 多肽,其中内源元素硒(Se)作为硒蛋白/ 多肽分子的识别元素,外源元素汞(Hg)作为硒蛋白/ 多肽 和含硒蛋白/ 多肽分子的区分元素。 通过对硒代半胱氨酸(SeCys)和谷胱甘肽过氧化酶1(GPx1)两种模型分 + 子的研究,外源邻羧基苯硫甲基汞(CH Hg-THI)动态解离的CH Hg 能够选择性标记硒代半胱氨酸残基 3 3 (SeCys)中硒醇基(-SeH),但不能标记含硒蛋白/ 多肽分子的硒代蛋氨酸残基(SeMet)中的—SeCH ,进而依 3 据Se和Hg的ICP-MS信号识别和检测硒蛋白/ 多肽。 本方法应用于富硒酵母水溶性提取液的分析,结果表 明,提取液中的硒蛋白/ 多肽能够被有效识别和检测,验证了Se-Hg双元素标签标记策略的发展是ICP-MS识 别和检测硒蛋白/ 多肽的一种可行且优越的途径。 关键词 硒;汞;硒蛋白/ 多肽;电感耦合等离子体质谱 1 引 言 以内源元素分析蛋白质已有很长的历史,130年前发明的凯氏定氮法(Kjeldahl method)就是利用检 [1] 测蛋白质内源元素氮进行蛋白质分析的经典范例 。 近二十年来,随着生命科学和分析技术的快速发 展,针对生物分子(如蛋白质和多肽)的新元素标签标记研究策略和方法不断涌现,而且还在快速发展 [2] 进程中 。 具有优异的元素分析能力(高的灵敏度和选择性)的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)与元 素标签策略的有机结合可以实现复杂生物体系中低丰度蛋白质和多肽等生物分子的分析[3~5]。 除了内 源元素标签,通过人为标记外源元素标签(如镧系元素、Hg、Au等)的研究策略因可以进一步扩展研究 范围和弥补内源元素标签的不足,越来越受到重视[6~14]。 但是,因为针对目标蛋白质/ 多肽如何建立起 内源元素标签和外源标记元素间的关系还有一定困难,目前报道的研究方法还多集中于单一利用内源 或外源元素,同时利用两类元素标签的研究工作还鲜有报道。 内源和外源双元素标记识别策略的建立, 需要满足以下要求:(1)目标生物分子需要含有内源性共价结合的标签元素;(2)目标生物分子能够被 外源性元素标签有效标记,并且所标记的外源元素标签与内源标签元素应发挥各自的识别、区分和检测 功能;(3)内源和外源性元素标签能够同时有效地被ICP-MS识别和检测。 在本课题组以前的研究工作中,不但利用内源元素硒(Se)定量地研究了人血浆中的硒蛋白,而且 利用外源元素汞(Hg)标签对多种蛋白和多肽