蛇毒丝氨酸蛋白酶多样性——底物专一性免疫化学及序列比较研究.pdfVIP

] 一3℃ 动 物 学 研 究 1994，15 (3)：73—l舢 CN 5卜l0帅 ／Q ISSN 0254-5853 ZoologicalResearch 蛇毒丝氨酸蛋 白酶多样性 — — 底物专一性免疫化学及序列 比较研究 糊 文 (中国科学院昆明动物研究所 65∞23) ，、J ／’C， 一0’七 摘要 本文报道烙铁头 (Trimeresurusmucrosquamatu,s)蛇毒纤维蛋 白原溶酶(TMVFg)，眼 镜王蛇 (0砷iophagush~nah)蛇毒纤维蛋 白原溶酶 (OhS1)，竹叶青 (Trimeresurusstejnegeri)蛇毒 专一纤溶酶原墩活剂(sv—PA)对 5种小分子多肽底物 的底物专一性，及这些蛇毒丝氯酸蛋白酶 对各种凝血因子 (第X因子、凝血酶原、纤溶酶原 、蛋 白c)的作用，井和其它蛇毒丝氯酸蛋白 酶 如矛 头蝮 (Bothropsagro 蛇 毒凝 血 酶样 酶 (Batroxobin)、铜 头蝮 (Agkistrodonco?ttogtr~x cotttDrtfix)蛇毒蛋白c擞活剂 ACC C、蝰蛇 (ViperarussetlO毒第v因子擞活剂 Rw —V进行比 较研究。通过酶标偶联免疫反应研究 了抗 sv—PA抗体与各种丝氯酸蛋白酶的免疫交叉反应，并 对蛇毒丝氯酸蛋白酶及相应功能的哺乳动物蛋白酶进行 了序列比较分析。从底物专一性 多样性 及已知序列结构分化上对这一类蛇毒丝氯酸蛋白酶的结构与功能进行 了探讨和研究。 关键词 — j重旦堕盟溆 、鼢 在长期的进化过程 中，蛇毒演化生成 了很多能作用于哺乳动物凝血及纤溶系统各因子 的蛋 白酶。通过专一性 的激活或灭活作用，这些蛋 白酶几乎作用于血凝纤溶系统的每一步 骤，产生促凝或抗凝效应。其 中一类在生化性质上属丝氯酸蛋 白酶类 ，如第V因子激活剂 (Kisiel，1979)、凝 血酶样酶(Ioth等，1987；Shieh等，1988)，纤维蛋 白原溶 酶(zhang 等 ， 1991)、蛋 白 C激活剂 (McMul~n等 ， 1989)及新近发现 的专一性 纤溶酶原激 活剂 (zhang，1992，1993)。对这一类蛋 白酶的结构与功能研究无疑会对我们搞清蛋 白质多样 性 ，结 构 与功 能 关 系 具有 重 大 意 义 。我 们 已纯 化 了烙铁 头 蛇 毒 纤 维 蛋 白原 溶 酶 TMVFg(Zhang等，1991)，眼镜王蛇蛇毒纤维蛋 白原溶酶 OhSl(Zhang等，1994)和竹叶 青蛇毒专一性纤溶酶原激活剂 SVPA(Zhang，1992，1993)，并生产 了兔抗 SV—PA 多克隆 抗体 ，对它们及其它蛇毒丝氨酸蛋 白酶进行结构与功能的比较研究是很有意义的。 1 材料 和 方法 1．1材料 多 肽 发 色 底 物 H—D—Phe—Pip—Arg—pNA (S-2238)， H—D—Val—Leu—Lys—pNA (S-2251)， H—D—Pro—Phe—Arg—pNA (S-2302)， H—D—Val—Leu—Arg—pNA (S-2266) 和 Bz—I1e—Glu—Gly—Arg—pNA (S-2222)，人纤维蛋 白原为瑞典 Kabi公司产 品。烙铁头 奉文 1993年 9月 8日收到， 1994年 1月 5日酱 回 74 动 物 学 研 究 15着 (TrimEresur~smllcrosq¨a~atus)蛇毒 、竹 叶青 (Trimeresurusstejnegeri)蛇 毒 、眼镜 王蛇 (0 io agushannah)蛇毒 由本实验室提供 。牛血第X因子、人凝血酶原、人尿激酶、人 Glu 纤溶 酶